产品货号 ： B5002
储存条件 ：试剂盒中 A、B 液 4℃保存；蛋白标准品（ BSA）置于-20℃保存 ，有效期 12 个月。
产品描述：
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将 Cu2+ 还原成 Cu+ ，产生一种紫蓝色复合物 ，在 562nm处有高的吸光值 ，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。 BCA 蛋白浓度 测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。 该 BCA 蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测 ，也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量（ 100μL）的蛋白样品 ，但由 于其在检测中使用蛋白样品与 BCA 工作液的比率为 1:20（v/v） ，从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便 ，仅 需少量（ 10-25μL）的蛋白样品。不过 ，由于其在检测中使用蛋白样品与 BCA 工作液的比率为 1:8（v/v） ，某种程度上限 制干扰物质的承受浓度以及降低最低检测水平。本试剂盒含有一系列浓度的蛋白质标准品溶液(BSA 溶液) ，即取即用 ，无需稀释 ，方便快捷。
编号 | 组分 | 产品包装/规格 | 储存 | |
500T (微孔) | B5002 -C 蛋白标准品浓度梯度及编号： BSA 标准品①(0μg/mL) ； BSA 标准品②(125μg/mL) ； BSA 标准品③(250μg/mL) ； BSA 标准品④(500μg/mL) ； BSA 标准品⑤(750μg/mL) ； BSA 标准品⑥(1000μg/mL)； BSA 标准品⑦(1500μg/mL) ； BSA 标准品⑧(2000μg/mL) | |||
B5002-A | 试剂 A | 100mL | 4℃ | |
B5002 -B | 试剂 B | 3mL | 4℃ | |
B5002 -C | 蛋白标准品（ BSA） | 8 个浓度梯度各 1mL | -20℃ | |
产品特点
1）提供即用型标准品 ，省去繁琐的稀释步骤。
2）灵敏度高 ，最小检测蛋白量可达 0.2μg ，检测浓度下限达到 10μg/mL(在 20~1000μg/ml 浓度范围内有较好的线性关 系）。
3）速度快 ，比一般的 BCA 蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的 Lowry 法检测速度约快 4 倍。
4）线性范围广 ，20-1000μg/mL 浓度范围内有较好的线性范围。
5) 准确性高：变异系数远小于考马斯亮蓝染色法。不受大部分样品中的化学物质的影响, BCA 法测定蛋白浓度的最大优点 是蛋白浓度的测定可以耐受高浓度的去垢剂, 可以兼容样品中高达 5%的 SDS; 5%的 Triton X- 100; 5%的 Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响 ，需确保 EDTA 低于 10mM ，无 EGTA ，二硫苏糖醇低于 1mM; β-巯基乙 醇低于 0.01%。详情见 7 的附表 1。
6) Bradford 法与 BCA 法的对比
方法 | Bradford 法 | BCA 法 |
灵敏度 | 1~5 μg | 0.5 ~20 μg |
时间 | 5~15 min | 40 ~60 min |
波长 | 595 nm | 562 nm |
检测不同类别蛋白质 | 变异系数较高 | 变异系数较低 |
吸光稳定性 | 1 h 内稳定 | 随时间变化 |
操作说明：以微孔酶标仪法为例
1 配置显色工作液：
a）计算显色工作液总量：
工作液总量 = (BSA 标准品样本个数＋待测样本个数 ) × 复孔数 × 每个样本显色工作液体积 举例 ：BSA 标准品样本个数为 8 个 ，待测样本个数 3 个 ，复孔数 3 个。
显色工作液总量 = (8个BSA 标准品样本＋3 个待测样本 ) ×3 个复孔 ×200 μL（每个样本工作液体积） = 6.6 mL
b）根据计算出的所需显色工作液用量 ，将试剂 A 和试剂 B 按照 50:1 的体积比 ，配制显色工作液 ，充分混匀。
注意 ：
1）由于加样可能存在误差 ，建议配制 BCA 工作液时 ，多配制 1~2 个孔的量；
2）新配制的 BCA 工作液室温密封条件下可稳定保存 24 h。
2 定量检测
① 分别取即用型 BSA 标准品① ~⑧ 各 20μL 加到 96 孔板中( BSA 标准品使用前须充分溶解摇匀)；
孔号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
添加物 | 标准品① | 标准品② | 标准品③ | 标准品④ | 标准品⑤ | 标准品⑥ | 标准品⑦ | 标准品⑧ |
体积 ( μL） | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
BSA终浓度(μg/mL) | 0 | 125 | 250 | 500 | 750 | 1000 | 1500 | 2000 |
② 用 1 × PBS 或 0.9% 生理盐水将样品适当稀释 (可以多作几个梯度 ，如 2 倍、4 倍、8 倍稀释) ，加 20μL 到 96 孔板的 样品孔中；
③ 各孔加入 200 μL 显色工作液 ，充分混匀 ，盖上 96 孔板盖 ，37℃孵育 30min ，冷却至室温；
注意 ：也可以室温放置2 h ，或 60℃放置 30min。 BCA 法测定蛋白浓度时 ，吸光度会随着时间的 延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而 加快。如果蛋白浓度较低 ，可在较高温度孵育 ， 或延长孵育时间。
④ 用酶标仪测定每个样品及 BSA 标准品的 A562 ，或 540~590 nm 之间的其它波长的吸光度 ，注意要减去空白对照(标 准品① + 工作液)的吸光度。
⑤ 绘制标准曲线 ，计算样品中的蛋白浓度。
注意 ：数据处理时需要去除明显错误的值。待测样品浓度可以从标准曲线中查得 , 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线， 可以从计算机给出的线性方程式计算出待测样品的浓度。
注意事项
1）本产品可以采用酶标仪 ( 微孔检测法 ) 或者分光光度计 ( 试管检测法 ) 测定蛋白浓度，如使用普通的分光光度计测定， 需根据比色皿的最小检测体积，适当加大 BCA 工作液的用量使其不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例 放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时 ，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少；
2）试剂在低温条件或长期保存可能出现沉淀 ，若发现 BCA 试剂 A 或者试剂 B 有沉淀发生。请 37ºC 温育并伴随搅拌促使 其充分溶解。如发现细菌污染 ，则应丢弃。
3）BCA 蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，显色反应的速度和温度有关，需注意保持定时和定温，以确保 精确定量。
4）每次测定都需做相应的标准曲线 ，因为显色反应与温度和时间的变化有关 ，精准蛋白定量宜每次都做标准曲线。
5）如待测样品中含较多的干扰物质 ( 具体见附表 ) ，可采用其它蛋白定量产品；
6）本公司所有产品仅限用于科研研发 ，必须专业人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！
