产品货号：T0212

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产品说明

2x Taq PCR Forest Mix 的浓度为 2x，使用方便快捷，能减少 PCR操作过程中的污染，使用时只需取适量2xTaq PCR Forest Mix绿色)，加入模板和引物，并加入ddH2O 补足体积，使反应体系浓度为 1x，即可进行 PCR 反应。PCR 产物 3'端带突出A碱基，纯化后可直接用于 T/A 克隆。

本产品能够高效扩增≤5 kb 的 DNA 片段，扩增产量高PCR Mix中包含两种染料，PCR产物无需添加Loading Buffer可直接点样电泳，且电泳过程中会出现两个指示条带。该染料不影响PCR扩增效率，但对于需要对PCR产物进行吸光度、荧光等光学分析的实验，建议在分析前对PCR产物进行纯化，或使用无染料的PCR Master Mix。

质量控制

核酸内切酶活性检测

将25 μl 2xTaq PCR Forest Mix与 200 ng 超螺旋质粒 DNA 配制成 50 μl 反应体系，在37°C下，共同温育4h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 10% 的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。

非特异性核酸酶活性检测

将25 μl 2xTaq PCR Forest Mix与 15 ng 双链 DNA 片段配制成 50 μl反应体系，在 37℃下温育 16 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测双链 DNA 底物无变化。

使用方法

1.常规 PCR 反应体系 ( 冰上操作 )

a. 需融解完全后使用，防止离子浓度不均匀；

b. 引物推荐终浓度为0.2~0.4 μM，效果不佳时可以在 0.1~1 μM 浓度范围内进行调整；

c. 不同模板最佳反应浓度有所不同，以 50 μl 体系为例：模板为基因组 DNA 时一般推荐的使用量为 10~400 ng；当模板为质粒或病毒 DNA 时，一般推荐的使用量为 10 pg~20 ng。

2. 三步法 PCR 反应程序

d. 菌落 PCR 时预变性 10 min，可充分破壁细胞，大肠杆菌或酵母菌均可高效扩增。

e. 退火温度请根据引物 Tm 值设置。如果需要，推荐通过建立温度梯度寻找引物与模板结合的最适温度。此外，退火温度直接决定扩增特异性，如发现扩增特异性差，可适当提高退火温度。

f. 目的片段长度< 3 kb，延伸时间可缩短至 30 s/kb；目的片段长度>3 kb，延伸时间建议 60 s/kb。