货号：T1211

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产品组成：

产品简介：

2× Lab SuperHF PCR Master Mix是即用型2×预混合溶液，包含Lab Super High-Fidelity DNA Polymerase、dNTPs 和精心优化的反应缓冲液，只需加入模板、引物和水即可进行高保真PCR反应。本产品适用于以基因组DNA、cDNA、质粒以及粗品为模板的PCR反应。

产品特点：

1. 保真度高，扩增速度快：保真度是普通Taq酶的70倍，扩增速度是Pfu的5倍。

2. 扩增片段长度长：使用λDNA、质粒等简单模板时，可以轻松扩增长达20 kb的片段；而使用基因组DNA等复杂模板时，能有效扩增长达12 kb的片段。

3. 2× Lab SuperHF PCR Master Mix对PCR抑制剂具有良好的耐受能力，对粗提样本也能进行很好的扩增。

反应体系：                              模板用量：

a. 当扩增片段 GC 含量 >60% 且优化条件也无法正常扩增时，推荐使用 2.5×PCR Enhancer来优化 PCR 反应。程序推荐：Touchdown PCR（降落 PCR）程序。

反应程序：

①三步法：

b. 对于普通模板，预变性可缩短至30~60 s；对于复杂模板，例如高 GC 序列，推荐延长预变性时间到3~5 min 以充分变性；

c. 根据引物 Tm 值设置退火温度。如引物Tm值≥72℃，可删除退火步骤，直接进行后续的延伸步骤(两步法PCR)。如果需要，可以建立一个温度梯度寻找引物与模板结合的最适温度。此外，退火温度直接决定扩增特异性。如发现扩增特异性差，可适当提高退火温度;

d. 对于大多数模板，30s/kb即可有效扩增; 对于一些复杂模板，可延长延伸时间至30~60 s/kb。

②两步法^e：

 e. 通常情况下使用两步法和三步法进行 PCR 扩增，性能无显著差异，可以根据操作习惯自行选择。但对于一些复杂模板(如长片段，Tm 分布不均匀，特殊结构模板)，可以尝试两步法或Touchdown PCR(降落PCR)法。此外，使用质粒为模板进行点突变时，也建议使用两步法。

③Touchdown PCR（降落 PCR）^f法：

 f. 该程序仅供参考，Touchdown PCR (降落PCR)有多种程序可灵活调整，请根据实验需求与习惯自行决定是否采用。

注意事项：

1. 请不要使用含尿嘧啶的引物和模板。

2. Lab Super High-Fidelity DNA Polymerase具有较强的校正活性，产生的扩增产物是平末端，如果用于下一步克隆实验，建议使用平末端克隆。如果扩增产物需要用于TA克隆，加A之前须先进行DNA纯化。

3. 为了提高扩增成功率和产量，请使用高质量的模板。

常见问题：