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  • 2×Lab FL PCR MasterMix(货号:FL0201)
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CAS:
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货号:FL0201

保存:-20°C 保存2年。短时间(1个月内)使用可以置4°C。

 

产品说明:

本产品包含Lab LastLong DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液,浓度为2×。 使用时只需加入模板、引物,并补足水至Mix终浓度为1×即可。本制品含红色示踪染料,不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳;也可经过纯化处理,以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。PCR产物为3,端带A头,纯化后可直接用LABLEAD LabpO TOPO TA系列载体(货号:PA0101、PA0102)克隆。

产品特点:

1. 超快的扩增速度:延伸速度可以达到5-10sec/kb,最短半小时完成PCR。

2. 突出的长片段扩增能力:可扩增高达10kb的长片段(包括人类基因组此类的复杂模板)。

3. 良好保真性:保真度是taq的3倍以上。

4.  强大的扩增能力:产量高,对于一些有特殊结构的复杂模板和GC含量高模板有良好效果。

建议PCR 体系设置:

Component

25 μl Reaction

50 μl Reaction

Final Concentration

2x Lab FL PCR mix  

12.5 μl

25 μl

1 ×

Forward Primer(10 μM) 

0.5 μl

1 μl

0.2 μM

Reverse Primer(10 μM) 

0.5 μl

1 μl

0.2 μM

Template DNA

as required

as required


ddH2O  

up to 25 μl

up to 50 μl



参考模板用量(50 μl反应体系):

质粒:0.1-10ng;细菌基因组:10-100ng;人类基因组:50-150ng;cDNA:1-5μl from RT reaction。

建议PCR循环条件: 

Step

Temperature

Time

Cycle Number

Initial denaturation 

94oC

2-3 min


Denaturation     

94oC

10 s

 

 25-35 cycles

Annealing

55oC

10-15s

Extension

72oC

10 s/ kb

Final Extension  

72oC

1-5 min



4-8oC

Hold



注意事项:

1. 本品扩增速度极快, 质粒和简单基因组等简单模板可以尝试5s/kb延伸速度并采用减少循环数以进一步缩短PCR时间;长片段(大于等于3kb)或者复杂模板产量较低应采用15-20s/kb延伸速度或者采用较多循环数。

2. Lab FL产量较低时可尝试采用较长的延伸时间(如20s/kb)和循环数(如35个)可以提高产物产量。

3. 对于GC含量很高的模板,短片段预变性和变性温度可以提高到98 oC和/或适当延长变性时间。长片段为了避免DNA损伤不应该提高变性温度,应该适当延长预变性时间到5min.,变性时间可以延长5-10s。

4. 如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时,可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%-8%,按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0-1.7 M。并采用降落PCR(Touchdown PCR)

 

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