产品货号：F0305-50ul

存储条件：-20℃干燥避光保存。

产品说明

Fluo-3, AM ester是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3, AM ester进入细胞后可以被细胞内源性酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光。

产品参数

使用方法

1.将溶液形式的Fluo-3, AM ester储液取出于室温回温。

2.用PBS或HBSS等缓冲液稀释Fluo-3, AM ester储液，制备4 μM的Fluo-3, AM ester工作液。

注：为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上使用最低探针浓度。

3.（可选）如果Fluo-3, AM ester进入细胞的效果不好，可向Fluo-3, AM ester溶液中加入适量20 % Pluronic F-127溶液，防止Fluo-3, AM ester在缓冲液中聚集并促进Fluo-3, AM ester进入细胞，Pluronic F-127终浓度控制在0.04-0.05 %。

注：（1）20 % (w/v) 的Pluronic F-127 DMSO母液配制：100 mg Pluronic F-127中加入0.5 mL DMSO，配制成20 % (w/v) 的DMSO母液。溶解需要在40-50℃加热20-30 min。溶解后室温保存，勿冷藏。如果有结晶析出，可以重新加热后溶解， 不影响使用。

（2）Pluronic F-127可降低Fluo-3, AM ester的稳定性， 因此只建议在配制工作液时加入，不建议将其加入储液中。

4. 取出预培养的细胞，除去培养基，使用PBS或HBSS溶液洗涤细胞3次。

5. 去除缓冲液，将Fluo-3, AM ester工作液加入细胞中，37℃培养10-60 min。

注：如果首次实验不能确定孵育温度和时间，建议尝试37℃ 孵育20 min，观察荧光效果。若细胞死亡较多，则适当缩短时间或降低温度；如果荧光强度太弱，则适当延长时间。

6.去除Fluo-3, AM ester工作液，用PBS或HBSS等缓冲液洗涤细胞3次，然后用PBS或HBSS等缓冲液重悬细胞，制成1×105 cells/mL的细胞悬液。

7.37℃培养10 min，确保AM ester体在细胞内的完全去酯化作用。

8.进行荧光钙离子检测。

注意事项

1.如果使用含有血清的培养基，血清中的酯酶会分解AM ester体，从而降低Fluo-3, AM ester进入细胞的效果。另外， 含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，加工作液前应尽量去除残留培养基。

2.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

3.Fluo-3, AM ester容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后开封。由于试剂极微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

4.Fluo-3, AM ester 遇水极易分解，如果不能一次用完，建议将储液小量分装保存。