货号：DR073
储存条件：-80℃保存。海肾萤光素酶工作液（B+C）混合液应新鲜配制，当天使用。有效期见外包装。
产品组分
组分 | 50T | 200T | 1000T |
5×Renilla Luciferase Lysis Buffer | 5 mL | 20 mL | 100 mL |
Renilla Luciferase Assay Buffer | 5 mL | 20 mL | 100 mL |
50×Coelenterazine | 100 µL | 400 µL | 2 × 1 mL |
产品介绍
真核基因表达调控研究常用的方法是进行报告基因的检测，生物发光法又是报告基因检测最常用的有效手段。萤光素酶能催化底物萤光素的转化，并发射出光子。该产品为海肾萤光素酶报告基因在哺乳动物细胞中的表达提供快速、灵敏、稳定的检测方法。
产品特点
1. 快速：细胞裂解在 10-15 min 内完成。
2. 方便：试剂易于配制，样品检测步骤简单。
使用方法
1. 细胞裂解
（1）将转入报告基因的细胞中的培养基移除，加 PBS 轻轻洗涤（贴壁细胞可直接进行此操作，悬浮细胞要离心收集细胞）。按如下方案加入 1×Lysis Buffer(用无菌水按 4:1 稀释A 组分)，然后将培养板放在微型震荡器上室温震荡 15 min，充分裂解细胞。
细胞培养板 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
裂解液体积 | 30µL | 60µL | 120µL | 250µL | 500µL |
注：裂解产物可室温保存 6 h，-70℃可长期存放（裂解产物不能多次反复冻融）。
（2）将充分裂解后的裂解产物，10000-15000 rpm 离心 3-5 min。离心后将上清液移入新的 EP 管中进行后续检测。
2. 萤光素酶检测
（1）按照仪器说明书将荧光测定仪打开，设定参数，测定时间为 10 s，测定间隔为 2 s。
（2）用 B 组分将 C 组分稀释成海肾萤光素酶工作液，稀释方法为将1 µLC组分加入到 49 µL B 组分中。
（3）将细胞裂解产物按照 20~100 µL 的体积加入测量管中 （保持每次样品量一致），另外加入100 µL 海肾萤光素酶工作液，充分混匀后测定 RLU（Relative light unit）。
注：海肾萤光素酶工作液不能长时间保存，现用现配，一次性使用完毕。
说明书下载
