货号：DR024-100T，DR024-1000T
组分 | DR024-100T | DR024-1000T |
A. 5×Firefly Luciferase Lysis Buffer | 10 mL | 100 mL |
B. Firefly Luciferase Assay Buffer | 10 mL | 100 mL |
C. D-Luciferin | 2 mg | 20 mg |
储存条件
-20℃保存。萤火虫萤光素酶检测液（B+C）混合液不可反 复冻融，建议进行小批量分装，并于-20℃（最长可储存1个月）或-80℃（最长可储存 1 年）条件下储存。
产品介绍
真核基因表达调控研究常用的方法是进行报告基因的检测，生物发光法又是报告基因检测最常用的有效手段。萤光素酶能催化底物萤光素的转化，并发射出光子。该产品为萤火虫萤光素酶报告基因在哺乳动物细胞中的表达提供快速、灵敏、稳定的检测方法。能够检测最低 10-20 mol 的萤光素酶，在 10-14 至 10-20 mol 的酶浓度范围内呈很好的线性关系。
产品优点
1. 快速：细胞裂解在 10-15 min 内完成。
2. 方便：试剂易于配制，样品检测步骤简单。
3. 灵敏：能够检测最低 10-20 mol 的萤光素酶。
4. 酶的浓度线性范围可达 8 个数量级。
使用方法
1. 细胞裂解
（1）将转入报告基因的细胞中的培养基移除，加 PBS 轻轻洗涤（贴壁细胞可直接进行此操作，悬浮细胞要离心收集细
胞）。按如下方案加入 1×Lysis Buffer(用无菌水按 4:1 稀释A 组分)，然后将培养板放在微型震荡器上室温震荡 15 min，
充分裂解细胞。
注：裂解产物可室温保存 6 h，-70℃可长期存放（裂解产物不能多次反复冻融）。
细胞培养板 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
裂解液体积 | 30uL | 60uL | 120uL | 240uL | 480uL |
（2）将充分裂解后的裂解产物，10000-15000 rpm 离心 3-5min。离心后将上清液移入新的 EP 管中进行后续检测。
2. 萤光素酶检测
（1）按照仪器说明书将荧光测定仪打开，设定参数，测定时间为 10 s，测定间隔为 2 s。
（2）将细胞裂解产物按照 20~100 µL 的体积加入测量管中（保持每次样品量一致），另外加入 100 µL 萤火虫萤光素
酶检测液，充分混匀后测定 RLU（Relative light unit）。
注：萤火虫萤光素酶检测液不能反复冻融，若单次实验用量较少，建议按照单次使用量分装成小规格。
注意事项
1. 温度会对酶的活性产生影响，因此所有试剂应放置室温后再使用。
2. 如果单管荧光测定仪测定，每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致。
3. 萤火虫萤光素酶催化的生物发光的最强波长为 560 nm。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5. 本产品仅用于科研。
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