CAS:
CAS：127274-91-3
产品货号：D2071-10 mg
储存温度：−20℃干燥避光
产品描述
DD，DO， DiI，DR 和 DS 染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞现结合后
其荧光强度大大增强，这类染鲜有着促高的淬灭常数和激发态寿命，-旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显:Dl(瞪色荧光)，DO(绿色荧光)，D(红色荧光)和 DR(深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DI和DO可以分别用标准的FTC和RITC的流光片。DiD可以用HE-NE激光器激发，有着比 Di 更长的激发波长和发射波长，在细能和组织染色中更有价值。DR 的红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。
表1.DiD，DiO，Dil，DiR，DiS的化学性质
*DiR的发射波长肉眼不可见，所以需要配备CCD镜头或其他的近红外检测仪器。
使用方法
1. DiD，DiO，DiI，DiR 和 DiS 细胞膜染色液制备
（1）配置 DMSO 或 EtOH 储存液：储存液用 DMSO 或 EtOH 配置浓度 1～5 mM。
注意：未使用的储存液保存在-20°C，避免反复冻融。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS 或 PBS）稀释储存液，配制浓度为 1～5 µM 的工作液。
注意：工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。
2. 悬浮细胞染色
（1）悬浮细胞密度为 1 × 106/mL 加入到工作液中。
（2）在 37 ℃培养细胞 2～20 分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
（3）染色细胞试管在 1000～1500 转离心 5 分钟。
（4）倾倒上清液，再次缓慢加入预温 37℃的培养液。
（5）重复（3），（4）步骤两次以上。
3. 粘壁细胞的染色
（1）使粘壁的细胞在无菌实验室培养。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）在盖玻片的一角加入 100μL 的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）在 37 ℃培养细胞 2～20 分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。（
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片 2～3 次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养 5～10 分钟，然后吸干培养基。
4. 显微镜检测
（1）DiD，DiO，DiI，DiR 和 DiS 滤光器的选择参见表 1。
（2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
a) DiI 和 DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI 和 DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO 和 DiD＝Omega XF93，Chroma 61005
5. 流式细胞仪的检测
DiD，DiO，DiI，DiR 和 DiS 染色的细胞可以分别用经典的 FL1，FL2，FL3 和 FL4 流式细胞仪检测
注意：
1) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅。
2) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！
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