货号:D0038-100T
存储条件:4℃避光保存,有效期见外包装。长期保存可以储存在-20ºC。
产品组分
组分 | D0038S(100T) | D0038L(500T) | 浓度 | 储存 |
A. Lab-Green II | 250 µL | 1.25 mL | 溶于有机溶剂 | 2-6℃ 干燥避光 |
B. QbtestTM 1× Buffer | 50 mL | 250 mL | 1× Buffer | 2-6℃ |
C. QbtestTM dsDNA 标准液 1 | 1 mL | 5 mL | 0 ng/μL | 2-6℃ |
D. QbtestTM dsDNA 标准液 2 | 1 mL | 5 mL | 10 ng/μL | 2-6℃ |
产品参数:Ex/Em: 480/520 nm(结合 dsDNA)
产品介绍
该试剂盒可用于 Qubit 仪器。Lab-Green II 双链DNA定量试剂盒是荧光检测dsDNA并进行定量的一种产品,这种检测方法非常灵敏。常用于分子生物学中cDNA文库的构建、亚克隆DNA片段的纯化及应用,如进行DNA定量、产物扩增和引物的进一步检测。常规的DNA含量检测方法是在260 nm处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大,并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰,无法区分DNA和RNA,而且灵敏度低(5 μg/mL dsDNA溶液A260=0.1)。Lab-Green II 双链DNA定量试剂盒检测方法简单方便。
Lab-Green II 只有与dsDNA结合后才发出荧光,并且荧光强度与DNA浓度成正比。Lab-Green II双链DNA定量试剂盒可以检测出10 pg/μL-100 ng/μL范围内的dsDNA ,且线性关系较好(R2>0.99)。
实验步骤
1.试剂制备
Lab-Green II 以浓缩液形式保存在有机溶剂中。实验时,配制工作溶液:1× Lab-Green II 工作液,将组分A用组分B按1: 200的比例稀释,如20 mL组分B中加入100 μL组分A。由于试剂容易吸附到玻璃表面,需在塑料容器中配制。Lab-Green II 试剂见光易降解,注意避光保存。
2.实验方法
(1)准备足够量的 0.5 mL 的可用于 Qubit 仪器的 Ep 管。
注:Qubit 仪器适用 Ep 管为透明的薄壁 Ep 管,Ep 管的侧面不要做标记,以免影响荧光值采集。
(2)制定标准曲线。准备两个Ep管,每管加入190 µL配置好的1× Lab-Green II 工作液,再分别向两个Ep管中加入10 µL组分C和组分D,涡旋震荡2-3 s,震荡过程中不要产生气泡。
注:确保加入的组分C和组分D是10 µL,终体积为200 µL。
(3)添加一定量体积的1× Lab-Green II 工作液到待测样品中,确保最终体积为200 µL。
注:一般添加样品的体积为1-20 µL,相应的添加1× Lab-Green I I工作液的体积为199-180 µL。
(4)室温孵育2 min。
(5)读取数据,生成标准曲线,计算样品中DNA 的浓度。
注意事项
1. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2. 1× Lab-Green II 工作液最好现配现用,以保证最佳结果。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。