产品货号：P2303

储存条件：-20℃

产品组成

产品简介

PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）来源于Elizabethkingia miricola，是一种高效的酰胺水解酶，可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。本产品通过大肠杆菌重组表达，带有His标签，含有50%甘油，常应用于抗体及其相关蛋白去糖基化。本品既可以在37℃下按照常规程序进行反应，也可以在50℃下快速完成去糖基化。

酶活定义：1 个酶活力单位 (U) 指在10 μl 反应体系中，37℃下反应 1 h从10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95%碳水化合物所需要的酶量。

失活条件：75℃温育 10 min。

质量控制

蛋白纯度检测

使用SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。

糖苷酶与蛋白酶活性检测

无可检出的内切糖苷酶F1、F2或F3活性；无可检出的蛋白酶活性。

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

1.1  变性条件下去糖基化

（1）常规步骤

① 将1~20 μg糖蛋白，1 μl 10× Denaturing Buffer 和 ddH2O（如有必要）混合至总体积10 μl； 

注：10× Denaturing Buffer 在低温储存时可能出现白色沉淀，使用前可先在37℃下温育使其溶解。

② 100℃反应10 min使糖蛋白变性后，冰上冷却，离心 10 s；

③ 加入2 μl 10× PNGase F Buffer，2 μl 10% NP-40，补充ddH2O 使总反应体积为20 μl；

④ 加入1~2 μl PNGase F，轻轻混匀，37℃孵育1~3 h。

（2）快速步骤

① 将1~20 μg糖蛋白，1 μl 10× Denaturing Buffer 和 ddH2O（如有必要）混合至总体积10 μl；

注：10× Denaturing Buffer 在低温储存时可能出现白色沉淀，使用前可先在37℃下温育使其溶解。

② 80℃ 反应2 min使糖蛋白变性后，冰上冷却，离心10 s；

③ 加入2 μl 10× PNGase F Buffer，2 μl 10% NP-40，补充ddH2O 使总反应体积为20 μl；

④ 加入1 μl PNGase F，轻轻混匀，50℃孵育10 min。

1.2 非变性条件下去糖基化

（1）常规步骤

① 将1~20 μg糖蛋白，2 μl 10× PNGase F Buffer和 ddH2O（如

有必要）混合至总体积20 μl；

② 加入 2~5 μl PNGase F, 轻轻混匀；

③ 37℃ 孵育 4~24 h。

（2）快速步骤

① 将1~20 μg糖蛋白，2 μl 10× PNGase F Buffer和ddH2

 O（如有必要）混合至总体积20 μl；

② 加入 1 μl PNGase F, 轻轻混匀；

③ 50℃孵育 10 min。

PNGase F 的去除

本产品带有His标签，反应后可选择与目标糖蛋白不同的标签，

通过亲和层析将PNGase F去除。