有效期1年

说  明

ATP酶和GTP酶会催化ATP或GTP分解为ADP或GDP和游离磷酸盐。这些酶在运输、信号转导、蛋白质生物合成和细胞分化中起关键作用。本试剂盒提供了一种简单直接的以微孔板形式测量ATP酶 / GTP酶活性的方法，使用单一试剂制剂即可在室温下准确测定酶活性。孔雀石绿试剂与酶释放的游离磷酸盐形成稳定的深绿色，产生与酶活性成正比的比色产物。一个活性单位是在测定条件下每分钟催化产生1μ摩尔游离磷酸盐的酶量。

试剂盒组成与保存

反应试剂：   25 mL                     4°C 保存

缓冲液：  6 mL            4°C 保存

标准品： 1 mL 1 mM磷酸盐       4°C 保存

注意：使用前所有试剂放置到常温；应确保所用酶试剂样本不含磷酸。检查方法是将200 μL反应试剂加入到40 μL的样品中，在波长620nm处，OD读数应该小于0.3。若读数大于0.3，请检查样本磷酸浓度。实验室洗涤剂应可能含有高含量的磷酸盐，请避免实验器皿接触到此类物质。

检测步骤：

1、绘制标准曲线：取50 μL 1 mM磷酸盐标准品与950 μL蒸馏水混合，配制成 50 μM的混合液。使用96孔板（透明平底），分别加40 μL标准品至不同孔中。再加入200 μL反应试剂，室温静置30分钟，读取620 nm处OD值。绘制标准曲线。

 2、酶样品检测：设定40 μL反应量，按下面比例，将酶样本和不含酶的空白对照放入不同的孔中，反应30分钟。再加入200 μL反应试剂，室温静置30分钟（反应试剂终止酶反应并且与酶反应产生的磷酸根生成有色化合物）。

                                反应孔                                       对照孔

                  20 μL缓冲液                               20μL缓冲液

                  10 μL酶样本                                       10μL H₂O

 10μL 4 mM ATP或GTP             10μL 4 mM ATP或GTP

酶活性：用反应孔的OD值减去对照孔的OD值。应选择适合的酶浓度，令测值在0.5-1间，以确保底物水解（<10%）处于线性反应动力学内，通过标准曲线可得到磷酸根浓度，从而计算出酶活性。1单位酶活性相当于在检测条件下，每分钟催化产生1μ摩尔游离磷酸盐的量。

防范措施：本产品仅供研究用，使用过程中应严格遵循实验安全措施，试剂含硫酸需回收处置。