保质期1年         

说  明

     β-葡糖苷酶可通过作用于末端非还原的β(1→4)-连接的D-葡萄糖残基来水解碳水化合物，同时释放D-葡萄糖。生物体需要β-葡糖苷酶来消化纤维素。溶菌酶，一种存在于泪液中的β-葡萄糖苷酶，可作用于革兰氏阴性细菌的肽聚糖细胞壁中存在的β(1→4)葡萄糖键，并有助于预防眼睛中的细菌感染。β-葡萄糖苷酶活性的缺失与戈谢病和帕金森病有关。在该检测中，β-葡糖苷酶活性通过β-葡糖苷酶水解对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷的反应来确定，该反应可形成比色(405 nm)产物，其与所存在的β-葡糖苷酶活性成比例。一个单位的β-葡糖苷酶表示在pH 7.0条件下，每分钟催化1.0 μmole底物水解所需的酶量。检测范围在2 U/L 到250 U/L之间。

应  用

直接检测生物样本中的β-葡萄糖苷酶活性。

试剂盒组成与保存

缓冲液：12 mL（pH 7.0）        -20℃保存

底物试剂：1 mL                 -20℃保存

校准液：5 mL（相当于250U/L）  -20℃保存

检测步骤

该检测基于酶催化的动力学反应，推荐使用多管移液器。反应试剂需快速加入，溶液的混合应当短暂而彻底。检测过程可以在室温或37℃条件下进行。

准备反应试剂：所有组分放置到室温。按每孔需200μL缓冲液、8μL α-NPG底物试剂的比例，混合足量反应试剂。在室温下，反应试剂可以稳定至少一天，但仍推荐现用现配。

样品准备：酶样品可置于50 mM (pH7.0)的磷酸盐缓冲液或其他合适的酶缓冲液中。以下化学物质会对酶活性有影响，应避免：如含有硫氢基的试剂（二硫苏糖醇，2-巯基乙醇和谷胱甘肽），Ca²⁺，Cu²⁺，Fe³⁺/Fe²⁺，Hg²⁺，Mg²⁺，Ni²⁺，Zn²⁺，SDS，EDTA与三羟甲基氨基甲烷等。

1. 取透明平底96孔板，将20 μL蒸馏水（H₂O）分别加入到两个孔中。向其中一孔内加入200 μL蒸馏水，另一孔中加入200 μL校准液（总量为220 μL）。取20 μL样品加入到其它孔中，并在样品孔内加入200 μL工作试剂（总量为220 μL）。轻拍使其混合。

2. 读取OD405nm值 (t = 0)， 并在20分钟后再次读取该值（t = 20 min）。

酶活性计算

样品的β-葡萄糖苷酶活性（U/L）计算如下：

OD₂₀与OD₀分别为样品在0分钟与20分钟时的OD405nm值。OD_校准液 与OD_H2O分别为校准液与H₂O的OD405nm值。

单位定义：pH=7.0时，1单位酶每分钟可催化1 μmole的底物转化。

预防措施：本产品仅供研究用，使用过程中应严格遵循实验安全措施。