保质期3年

一般说明

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G₆PDH)是戊糖磷酸盐途径中的一种细胞膜酶，它通过维持辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐（NADPH）的水平为细胞提供还原能量。G₆PDH将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐（NADP）还原成NADPH，同时氧化葡萄糖-6-磷酸（G₆P）。患有G₆PDH遗传缺陷的患者容易患非免疫性溶血性贫血。本公司的非放射性比色检测是基于四唑盐MTT在NADH偶联的酶促反应中被还原成MTT的还原形式，在565nm处显示出吸收最大值。在565nm处的吸光度与酶的活性成正比。检测范围：0.2至100 U/L。

适用性

测定各种生物样品（如血浆、血清、尿液、组织和培养基）中的G₆PDH活性。

试剂盒组成(96孔板供100份检测)

储存: 所有试剂均在–20°C保存。 

检测步骤

这种测定是以动力学反应为基础的。为确保相同的孵化时间，向样品中加入反应试剂的速度要快，搅拌时间要短但要彻底。建议使用多通道移液器。检测可以在任何需要的温度下进行（如25°C或37°C）。 

 一、样本制备：

血清和血浆直接进行检测。 

组织：在解剖前，用磷酸盐缓冲盐水（pH7.4）冲洗组织以去除血液。在含有50mM磷酸二氢钾（pH7.5）的约200µL缓冲液中匀浆组织（50mg）。在4°C下以10,000 x g离心15分钟。取上清液进行检测。 

细胞裂解液：在4°C下以2,000 x g离心5分钟，收集细胞。对于粘附细胞，不要用蛋白水解酶来收获细胞，而是用刮除器。在含有50mM磷酸二氢钾（pH7.5）的适当体积的冷缓冲液中匀浆或超声处理细胞。在4°C下以10,000 x g离心15分钟。取出上清液进行检测。

所有样品可在-20°C至-80°C下储存至少一个月。

二、反应试剂准备：

将试剂平衡到所需的反应温度（如25℃或37℃）。在使用前对试剂进行简单的离心。

为所有检测孔准备足够的反应试剂，为每个96孔检测孔混合：8μL底物，8μL NADP/MTT，1μL心肌黄酶和70μL缓冲液。

三、反  应： 

1. 将100μL水（OD_H2O）和100μL 校准液（OD_CAL）溶液转移到透明平底96孔板的孔中。

2. 将20μL样本转移到不同的孔中，然后在每个样品孔中加入80μL 反应试剂。短暂敲击孔板以混合。

3. 在酶标仪上读取OD_565nm（OD₀），并在15分钟后再次读取（OD₁₅）。

四、计 算

从每个样品的OD₁₅中减去OD₀来计算DOD_S值。然后，G₆PDH活性可按以下方式计算：

其中ε_mtt是还原MTT的摩尔吸收系数。l是光的路径长度，由校准器计算得出。OD_CAL和OD_H20是校准液和水的OD_565nm（ODo）值。t是反应时间（建议时间为15分钟）。反应体积和样品体积分别为100µL和20µL。n是稀释系数。 

单 位 定 义 ： 在pH值为8.2时，1个单位（U）的G6PDH每分钟可催化1微摩尔NADP向NADPH的转化。

注意： 如果样品的G₆PDH活性超过100 U/L，可以使用较短的反应时间，或者将样品在水中稀释，然后重复检测。对于G₆PDH活性<1 U/L的样品，孵化时间可延长至2小时。

注意事项：本产品仅供研究用，使用过程中应严格遵循实验安全措施。