有效期1年
一般说明
一氧化氮是氮的化合物，化学式NO，分子量30，氮的化合价为+2。由于一氧化氮带有自由基，这使它个化学性质非常活泼。一氧化氮（NO）是一种活性基团，在许多关键的生理功能中发挥着重要作用。NO 是一氧化氮合成酶氧化精氨酸的产物，参与机体防御反应和生长发育、蛋白调节及功能性生物分子间的相互作用。在检测中，NO可被氧化生成亚硝酸盐和硝酸盐，因此通常测量NO2-/NO3- 的总浓度作为NO的指标。本试剂盒可准确测定硝酸盐还原成亚硝酸盐后的NO产物。检测范围 0.6 - 200 mM。
应用
直接检测：血浆、血清、尿液、组织/细胞及食品中的NO浓度。
试剂盒组成与保存
试剂A： 6 mL | 试剂B：300 mL | 试剂C：6mL |
NaOH： 1 mL | ZnSO4： 1 mL | 标准液：1 mL |
储存：试剂A、试剂B、试剂C和标准液在4°C下保存，其它试剂可在室温下保存。
预处理
样品处理：组织或细胞样品用1 x PBS 溶液（pH 7.4）均浆。在4℃下以10,000g或更高的转速离心。取上清液用于NO 检测。
血清、血浆、全血、含FBS的细胞培养液、组织或细胞提取物, 需进行脱蛋白处理。尿液和唾液无需脱蛋白处理。
脱蛋白处理: 在1.5mL离心管中加入150 mL样品和8 mL ZnSO4混匀，然后加8 mL NaOH，再次混匀。在14,000转/分的转速下离心10分钟。转移100mL上清液到干净的管中。注意：脱蛋白处理时，若平行将150 mL标准液同样用ZnSO4 和 NaOH处理，则不需要再计算稀释倍数。
检测步骤
1. 标准品：将50 mL 1.0mM标准液与450 mL蒸馏水混合，配制500 mL 100 mM预混液。使用1.5mL离心管，如下表所示稀释标准液：
标号 | 预混液 + H2O | Nitrite (mM) |
1 | 250 mL + 0 mL | 100 |
2 | 150 mL + 100 mL | 60 |
3 | 75 mL + 175 mL | 30 |
4 | 0 mL + 250 mL | 0 |
2、反应：将100 mL样品加入分别标记的离心管中。（建议样品的检测做一式两份）。准备足够的反应试剂，按每个反应管混合： 100 mL试剂A，4 mL试剂B和100 mL试剂C。在每个样品和标准管中加入200 mL反应试剂，在60℃下反应10分钟（也可在37℃下反应60分钟, 或常温下反应150分钟）。
3、测试：短暂离心去除沉淀颗粒，转移250 mL反应产物到96孔板的不同孔中。在540nm 处读取吸光值。
浓度计算
从标准品的OD值中减去空白对照（Std 4）的OD值。绘制OD与标准浓度的曲线, 通过线性回归计算斜率（Slope），单位换算：1 mg/dL NO 相当于333 mM、0.001%或10 ppm。
注意：1.抗氧化剂和亲核试剂（如：b-巯基乙醇、谷胱甘肽、二硫苏糖醇和半胱氨酸）可能会干扰这项检测，因此样品制备过程中应避免使用这类化合物。
2.预防措施：本产品仅供研究用，使用过程中严格遵循实验安全措施。
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