一般说明

乙酰胆碱酯酶（AChEs）是将神经递质乙酰胆碱（ACh）水解为乙酸和胆碱的酶。AChE位于突触间隙并且可通过催化ACh的分解来终止突触传递，从而允许胆碱能神经元在激活后返回静息状态。 它还存在于红细胞、运动和感觉纤维、肌肉、神经以及中央和外周组织的膜中。AChE活性的变化可能是由于暴露于某些杀虫剂环境下导致的，这些杀虫剂起到胆碱酯酶抑制剂的作用。AChE抑制剂也可用于治疗某些疾病，例如痴呆症。利用ACHE催化得到的硫代胆素，与显色剂二硫代双硝基苯甲酸反应呈现出黄色，通过测定产物颜色，从而计算样本中酶的活性。乙酰胆碱酯酶的活性检测范围为10 - 600 U/L之间。

产品应用

可直接检测血液、血清、血浆和其它生物样本中乙酰胆碱酯酶的活性。

试剂盒组成

缓冲液：30 mL                    

反应物：240 mg

校准液：4 mL（相当于200U/L ）

储存：常温保存。有效期1年

样品准备

血液样品需用缓冲液稀释40倍。例如，用吸量管精确吸取5 μL血液与195 μL缓冲液混合。组织或细胞样品加入0.1 M磷酸盐缓冲液，短暂的超声波处理或匀浆后，14,000rpm离心5分钟，取上清进行检测。最好采用新鲜的样品进行检测，如条件不允许，请将样品冷藏，并在24小时内检测。

反应试剂制备

反应试剂应现用现配，并在30分钟内使用。每一反应孔需2 mg反应物。计算出所需的总试剂量，用离心管进行称量。每2 mg反应物加入200 μL的缓冲液，摇匀使其充分溶解。

检测步骤

1. 标准液、空白对照：取透明平底的96孔板，分别将200 μL水、200 μL校准液，10 μL样品放入不同的孔中。

2. 显色反应：将190 μL配制好的反应试剂放入有样品的孔内，并轻敲使其混合，分别在反应2分钟和10分钟时读取OD_412nm测值。

酶活性计算

乙酰胆碱酯酶活性计算公式：

OD₁₀和OD₂分别代表样品在10分钟和2分钟时的OD测值；OD校准液和OD水分别代表校准液和水在10分钟时的OD测值；n是稀释系数（血液样品n = 40）；数字200代表校准液在检测条件下的等价活性。注意：如果计算所得酶活性大于600 U/L，请用缓冲液稀释待测样品并再次检测，结果需要乘以稀释系数。

单位定义：在检测条件下（室温，pH = 7.5），每单位酶每分钟可以催化产生1 μmole的硫代胆素。