有效期1年
一般说明
脲酶是一种催化尿素水解成二氧化碳和氨的酶。 脲酶存在于细菌、酵母和某些高等植物物种中。脲酶活性存在于环境和粪便样品中；许多胃肠道或泌尿道病原体会产生脲酶。因此，它的活性对于病原体如幽门螺杆菌是有用的诊断参数。脲酶活性通常在牛瘤胃、人类粪便和环境样品（如土壤和浮游植物）的厌氧菌中测定。检测原理是：脲酶与尿素反应，产生的颜色变化在 670 nm处测定，该检测方法简单、灵敏、稳定且高通量，可量化低至 0.01 U/L 的脲酶活性。
适用性
生物和环境样品中的脲酶活性测定。
试剂盒规格
缓冲液： 20 mL (pH 7.0) 试剂 A：12 mL
尿素： 1.5 mL 试剂 B：6 mL
NH4Cl： 100 mL 50 mM
储存：试剂和标准品均在4°C下保存。
检测步骤：
注意：已知氨会干扰该分析，在分析之前，应通过透析或过滤去除。
1. 测定准备。在测定之前，将所有组分置于室温。对于标准曲线，通过混合 5mL 50 mM NH4Cl 和 495mL缓冲液制备 500mM 预混液。如下稀释NH4Cl.
标号 | 预混液 + 缓冲液 | 终量(mL) | (mM) |
1 | 100mL + 0mL | 100 | 500 |
2 | 80mL + 20mL | 100 | 400 |
3 | 60mL + 40mL | 100 | 300 |
4 | 40mL + 60mL | 100 | 200 |
5 | 30mL + 70mL | 100 | 150 |
6 | 20mL + 80mL | 100 | 100 |
7 | 10mL + 90mL | 100 | 50 |
8 | 0mL + 100mL | 100 | 0 |
分别转移90mL到透明平底 96 孔板的单独孔中。
对于样品，用缓冲液稀释样品（注意：谨慎测试不同的稀释度以确保脲酶活性在检测范围内）。 将 90mL样品转移到单独的孔中。另需使用90mL酶缓冲液作为样品空白对照。
2. 酶反应。 向每个孔中加入10mL尿素。在所需温度下孵育10分钟。
3. 检测。 向每个孔中加入100mL试剂A。 轻敲孔板混合。 然后在每个孔中加入50mL试剂B。 轻敲孔板再次混合。 注意：添加试剂 A 终止脲酶反应。
在黑暗中孵育 30 分钟。 在 670nm 处读取吸光强度。
计 算
绘制 NH4Cl 标准曲线并确定其斜率 (mM-1)。 样品中的脲酶活性计算为：
其中 OD样本和 OD空白是样品和样品空白（酶缓冲液）测得的 OD 值。 t 是标准脲酶测定的孵育时间（10 分钟）。如果脲酶活性高于 25 U/L，在缓冲液中稀释酶，重复测定并将计算的活性乘以稀释因子。
单位定义：在测定条件下，在 pH 7.0 的条件下，1 个单位的脲酶每分钟催化形成1mmole 氨。
说明
可以使用任何既定方法在缓冲液（10 mM 磷酸钠，pH 7.0）中提取土壤和其他环境样品。对于低脲酶活性样品，在 30 或 37°C 下孵育脲酶反应 2 至 4 小时（步骤 2）。 土壤样品可能含有非常低浓度的氨。为了校正样品氨，在即将检测（步骤 3）之前，通过按以下顺序混合以下物质来制备样品空白：100 mL试剂 A、90mL样品提取物、10mL 尿素和 50 mL试剂 B。
预防措施
本产品仅供研究用，使用过程中应严格遵循实验安全措施。
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