一般说明

脂质过氧化是由氧化损伤造成的脂质降解，是氧化应激的重要标志。多不饱和脂质通常易受活性氧的氧化攻击，引起明确的链反应并生成最终产物，如丙二醛(MDA)。脂质过氧化影响许多疾病的病理，包括动脉粥样硬化、糖尿病和阿尔茨海默氏病。本试剂盒通过MDA与硫代巴比妥酸（TBA）反应形成的比色(535 nm)/荧光 (λex = 560/λem = 585nm) 产物测定脂质过氧化，产物与存在的MDA成比例关系。检测范围，比色法1-30 uM，荧光法0.1-1.5 uM MDA。

产品应用

适于测定组织、细胞和血浆等各类样品中的丙二醛(MDA)。

 
试剂盒组成与保存

TBARS试剂：25 mL                   -20°C保存

标准品：50 uL                  -20°C保存

10% TCA：25 mL                     -20°C保存

有效期 1年

样品准备

如果不即时检测，样品可在 -80°C冷冻保存一个月。尿液和唾液样本，可直接检测(n = 1)。下面的样品在检测前需要去蛋白：

(1) 血清、血浆：将100 uL样品转移到一个标记好的1.5 mL离心管。组织和细胞样品：向约20 mg样品或5×10⁶细胞加入200 uL含蛋白酶抑制剂的冰冷PBS，在40伏特下超声粉碎20秒。如果需要，移除20 uL作蛋白分析。将100 uL裂解液放置到另一个1.5 mL离心管中。

(2) 将200uL冰冷的10％TCA(三氯乙酸)加到到每个100uL样品中，摇匀，在冰上放置15分钟。

(3) 在14000rpm离心5分钟。转移200uL上清液到另一个已标记好的离心管。这些预处理的样品的稀释因子是n = 3;

比色法测试步骤：

将水浴或加热孔板温度调节到100℃。所有试剂放置至室温。向15mM标准品管加入450uL dH₂O，混合得到1.5mM MDA标准品。未使用的标准液储存在-20℃供以后使用。

(1) 标准液： 将15uL 1.5mM MDA 与735uL dH₂O混合，得到30uM MDA。按照下表稀释标准液。分别转移200uL标准液到一个标好的1.5 mL离心管。 

样品：转移200 uL样品到其它标准液到一个标好的离心管。

(2) 显色反应：向标准液和样本中添加200uL TBA试剂，混匀后，在100℃下孵育60分钟。将离心管冷却至室温，混匀离心。

(3) 从上述离心管取出100uL上清液，加至平底透明96-孔板中，在535nm处读吸光度。 

荧光法测试步骤

(1) 按比色皿法准备标准液。转移10uL标准液到标好的离心管中，再加190uL水(终浓度0, 0.45, 0.90, 1.50 uM MDA)。在其他标好的离心管中加入200 uL处理好的样品。

(2) 显色反应：向标准液和样本中添加200uL TBA试剂，混匀后，在100℃下孵育60分钟。将离心管冷却至室温，混匀离心。

(3) 从上述离心管取出100uL上清液，加至黑色96-孔板中，读取荧光强度(lex/em = 560nm/585nm)。

浓度计算

所有标准品和样品吸光值减去空白对照的吸光值或荧光强度，对标准浓度作图并确定标准曲线的斜率(Slope)，计算样品TBARS的浓度：

R_样本和 R_空白分别代表样品和水的OD_535nm值或荧光强度；n是稀释系数(去蛋白样品 n =3)。

注意：如果计算出TBARS的浓度高于30 uM MDA(比色皿法)或者1.5 uM MDA(荧光法)，用水稀释样品重新测试，乘以稀释倍数。

注意事项：本产品仅供研究用，使用过程中严格遵循实验安全措施。