
一般说明
葡萄糖(glucose),有机化合物,分子式C6H12O6。是自然界分布最广且最为重要的一种单糖,它是一种多羟基醛。本公司的葡萄糖试剂盒采用单一工作试剂, 将葡萄糖氧化酶反应与葡萄糖含量的测定合并到同一步骤。反应产物的吸光强度(570nm)或者荧光强度(585/530nm)与样品中葡萄糖的浓度成正比。检测范围:比色法5 - 300 mM,荧光法 1 - 30mM。
适用范围
直接检测:生物样品如血清、血浆、尿液等的葡萄糖浓度。
试剂盒组成
缓冲液: 5 mL 酶试剂:60 mL
显色剂:60 mL 标准液:1 mL 3g/L葡萄糖
储存:所有试剂均于-20°C保存。有效期1年
比色法检测
样品准备:唾液样品应在化验之前以14000rpm的转速离心 5分钟。牛奶样品应按100 mL 6N HCl和600 mL milk的比例混合,以14000rpm的转速离心并转移上清液到一洁净管,每毫升上清液添加170 mL 6N NaOH中和。并再以14000rpm的转速离心。取上清液检测。在此过程中稀释系数为n = 1.36。
样品收集后应立即检测,或储存于-20 ° C。避免反复冻融。如果有悬浮微粒存在,离心样品并使用上清液检测。
1. 将所有试剂放置至室温。检测过程中将已解冻的酶试剂始终置于冰箱内或者冰上。
2. 标准品和样品:将15mL 3g/L标准液与818mL 蒸馏水dH2O混合(预混浓度为300 mM)。用dH2O稀释标准品,比例如下:
转移20 mL稀释的标准品和样品至每个孔内。
标号 | 预混液 + H2O | 终量(mL) | (mM) |
1 | 200 mL + 0 mL | 200 | 300 |
2 | 120 mL + 80 mL | 200 | 180 |
3 | 60 mL + 140 mL | 200 | 90 |
4 | 0 mL + 200 mL | 200 | 0 |
3. 反应试剂: 对每个反应孔按85 mL 缓冲液, 1 mL 酶试剂(在移液前稍微摇晃), 和1 mL显色剂的比例在一试管内混合,向每孔加入80 mL反应试剂。轻轻振荡混匀。
4.室温下培养30分钟,读取570nm波长处的吸光度。
浓度计算
从标准品的测值中减去空白对照的测值(标号4),绘制DOD与标准浓度的曲线。测定斜率(Slope)并计算样品中葡萄糖的浓度:
单位换算:1 mM葡萄糖相当于55.5 mM, 0.001% or 10 ppm。
荧光法检测
对于荧光法检测,线性检测范围为1 -30mM葡萄糖。用比色法中的标准液10mL与190 mL 蒸馏水混合得到30、18、9、0mM的标准液。转移20 mL标准品和20 mL样品至黑色96孔板的相应孔内。添加80 mL反应试剂(参看比色法),轻轻振荡混匀。
室温下培养30分钟,读取 (585/530nm) 荧光强度。样品的葡萄糖浓度计算同上。
注意:
(1)如果计算出样品中葡萄糖的浓度高于300mM(比色法)或者30mM(荧光法),用水稀释样品并再次检测,用稀释系数n乘以结果.
(2)检测酚红培养基中的葡萄糖浓度时,比色法应用不含葡萄糖的培养基稀释样品和标准品。对于荧光法应先用酚红培养基稀释标准品,再用水20倍或以上倍数稀释样品和标准品后检测。
注意事项:本产品仅供研究用,使用过程中应严格遵循实验安全措施。