货号：M0056

存储条件：-20℃保存，保存期限为1年。

产品简介

支原体（MYCO）快速检测试剂盒（显色法）是基于环介导等温扩增（LAMP）技术开发的快速检测试剂盒，主要针对细胞培养过程中，临床或环境中支原体（MYCO）的检测。经测试，本试剂盒至少可以检测以下48种支原体：

其中，前8种是最常见的污染细胞的支原体种类。

本试剂盒利用快速可视化颜色判读技术，适用于制药、科研、食品、环境、等企业质控体系中的快速筛查。具有以下优势:

①　操作简便，快速出结果：只需水浴锅反应，检测仅需40分钟；

②　判读简单：通过可视化颜色直观判读；

③　灵敏度高：最低检测下限在10-100copies/mL；

④　抗干扰能力强：受杂质影响小，因此一般无需额外核酸提取步骤；

⑤　不受PH干扰：样本和试剂的PH变化不影响检测结果。

产品组分

使用说明

1、 待测样本准备

方法一：核酸提取后样本：直接作为模板，加入反应体系中。

方法二：未提取样本(浓缩)：取1500μL细胞培养液，先1000rpm低速离心5min，将离心后的1000μL上清转移到另一个离心管内，丢弃细胞沉淀。再将上清继续10000rpm高速离心5min，小心吸走全部上清（不要碰到底部），用10-20μL核酸释放剂或水重悬沉淀（沉淀中含有支原体），涡旋混匀后进行检测。

2、 配制反应体系：

配制前试剂必须涡旋混匀再离心，切勿剧烈振荡。每次反应需设置1个阴性对照和1个阳性对照，为避免移液误差，建议按照实际反应数1.05倍配制反应体系。

3、加样

将配好的反应体系吹吸均匀，每管23μL分装到反应管中，向待测管中加入2μL待测样品，向阴性对照管中加入2μL去离子水，向阳性对照管加入2μL阳性参考品。在放入水浴锅之前，须向反应管中滴加20μL的矿物油以防止液体蒸发。加样后离心混匀。

反应条件

将水浴锅温度设置成65℃，放入反应管，孵育40min。若40min后阴阳颜色区分很明显，不得继续反应，否则容易出现假阳性。若40min后阴阳颜色区别不明显，可适当继续反应1-5min。

4、结果判读

颜色判读：取出反应管，放于室温，在光线良好的环境中观察反应结果，如果反应液为粉红色，则判定为阴性；若反应液为黄色，则判定为阳性。颜色变化反应如下：

注意事项

1、建议使用水浴锅和导热良好的PCR反应管进行检测。

2、不建议使用金属浴或PCR仪器等进行反应，因不同的设备的加热速率差别较大，造成试剂的变色时间存在较大差异，若未及时观测结果，容易造成假阳性。

3、建议使用0.2mL的PCR管，若使用0.6mL或1.5mL的离心管，因内直径变大需要适当增加石蜡油来保证全面密封反应体系；同时因管壁厚度增加了，需要适度增加反应时间来保证反应的充分完成。

4、金属离子螯合剂会影响反应进行，因此样本中的EDTA等只能微量存在或尽量不存在。

5、如果反应后颜色介于阴性和阳性之间，应重复实验，或者与其他检测方法进行比较。

6、为了您的安全和健康和避免交叉污染，操作时请佩戴手套。

7、试剂盒-20℃保存，避免反复冻融（有效期12个月），解冻后需彻底混匀。

8、建议实验操作涉及的仪器和设备需要定期校准，特别是移液器和水浴锅，对反应快慢的准确性影响很大。

9、建议配置完反应体系后先加阴性对照和待测样本，石蜡油液封后，再添加阳性对照质粒样本，石蜡液封后，放入水浴锅进行反应。且接触过阳性对照的枪头建议弃置于可密封的废液桶内并及时清理。从而避免阳性对照质粒照成污染。

10、本试剂盒属反应超高灵敏度的检测，反应过程中及反应完成后请勿打开PCR管盖，等温扩增产物宜密封后按扩增后产物要求处理，以避免超高浓度的扩增产物由于气溶胶等因素污染实验环境。

11、要保证本实验的操作环境没有支原体或其核酸污染，否则极其容易造成假阳性结果。

12、必须确保使用的移液枪本身没有残留的支原体。因此，最好使用全新购买的移液枪。如果没有新购买的移液枪，至少应该使用以前没有进行过细胞培养的移液枪。因为进行过细胞培养的移液枪极有可能被含支原体的培养液污染（如细胞培养时，不小心将含支原体污染的培养液吸入移液枪的枪体内）。移液枪中吸附的支原体有可能造成不必要的假阳性。

13、强烈建议使用滤芯吸头（比如 Axygen 滤芯吸头）吸取相关溶液和阳性支原体等。如果没有滤芯吸头，至少应该使用新开封的吸头。

14、本试剂盒仅供科研使用。