说 明
乳酸是由乳酸脱氢酶在缺氧和无氧条件下生成的，因此，乳酸水平是反应组织氧需求和利用平衡的良好指标，适用于细胞和动物生理学研究。 简单、直接和自动化的乳酸浓度检测法极受欢迎。L-乳酸检测试剂盒的检测原理是乳酸脱氢酶催化乳酸氧化，过程中形成的NADH可还原甲臜(MTT)试剂，产物颜色的强度（在565nm处测量）与样品中的乳酸浓度成正比。检测范围：0.08～2 mM乳酸，对于含有酚红的细胞培养物样品，检测范围为0.1 mM ～1 mM 乳酸。
适用性
适用于血清、血浆和细胞培养基样品中的乳酸含量测定。
试剂盒组成和保存
缓冲液：10 mL NAD试剂： 1 mL 酶A：120 mL 酶B：120 mL MTT 试剂：1.5 mL 标准品：1 mL 20 mM 储存：所有试剂-20°C保存。有效期1年
检测步骤
注意：该测试是基于酶动力学反应，加入工作试剂应迅速并要短暂混合。推荐使用多通道移液器。
1. 标准曲线：将100mL 20 mM标准品与900mL蒸馏水混合制备1000 mL 2 mM的L-乳酸预混液。对于含有酚红的细胞培养物样品，将50mL 20mM标准品与无血清的950mL培养基混合制备1000 mL 1 mM 乳酸预混液。稀释标准品如下：
标号 | 预混液 +水 或培养基 | Vol (mL) | L-乳酸(mM) |
1 | 100mL + 0mL | 100 | 2.0 or 1.0 |
2 | 80mL + 20mL | 100 | 1.6 or 0.8 |
3 | 60mL + 40mL | 100 | 1.2 or 0.6 |
4 | 40mL + 60mL | 100 | 0.8 or 0.4 |
5 | 30mL + 70mL | 100 | 0.6 or 0.3 |
6 | 20mL + 80mL | 100 | 0.4 or 0.2 |
7 | 10mL + 90mL | 100 | 0.2 or 0.1 |
8 | 0mL + 100mL | 100 | 0 |
转移20 mL标准品至透明平底96-孔板的孔内。
样品: 添加20 mL样品到不同的孔内。对于潜在含有活性酶的样品(如血清，血浆，组织提取物)，应设置两组不同反应：一组加入酶试剂A，而另一组作为对照不加酶试剂A。血清和血浆在检测前应该用蒸馏水至少稀释2倍。
2. 反应试剂制备：移液前短暂离心酶试剂管。每个反应孔按60 mL 缓冲液, 1 mL酶A, 1 mL酶B, 8 mL NAD 和 14 mL MTT的比例配制足量反应试剂。推荐现用现配。对无酶试剂A的样品对照组，按60mL缓冲液, 1mL酶B, 8mL NAD 和14mL MTT配置反应试剂。
3. 迅速向每个标准品孔和样本孔添加80mL反应试剂，轻敲孔板使其混合。
4. 读取时间为零分钟的光密度(565nm)，及在20分钟培养后的光密度。
5. 计算：分别从标准品和样品的测值OD20中减去OD0。对照标准曲线计算样品中乳酸的浓度。对于需对照的样品（不含酶试剂A），需从DOD样本减去DOD无酶A，用DDOD值测定样品L-乳酸浓度。
注意：如果样品的OD值比2 mM L-乳酸标准品OD值高，需用水稀释样品并再次测测，结果乘以稀释系数。
注意事项：
1.本产品仅供研究用，使用过程中应严格遵循实验安全措施。
2.样品制备过程中应避免使用下列干扰物质：抗坏血酸,SDS (>0.2%),叠氮化钠,NP-40(>1%)和Tween-20(>1%)。
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