一般描述
胆固醇是哺乳动物细胞膜的重要组成部分，它在细胞内运输、细胞信号传导和维持细胞膜流动性方面发挥作用。在血液中，胆固醇以游离酸和胆固醇酯的形式循环。控制血清胆固醇水平具有重要的治疗作用，因为胆固醇水平升高与动脉粥样硬化和心血管疾病的发展有关。近来的证据表明，胆固醇稳态的紊乱有助于慢性炎症状态的发展。胆固醇主要由肝脏产生。胆固醇水平异常与冠心病有关。胆固醇与乳腺癌的进展或抑制有关。肿瘤细胞能够合成它们自己的胆固醇，这有助于细胞增殖。在癌症中观察到胆固醇水平的升高，尤其是在前列腺癌中。肥胖症或者中观察到胆固醇升高。本公司所生产的胆固醇检测试剂盒仅使用单一工作试剂，将胆甾醇酯水解、氧化及显色反应结合为一个步骤。反应产物的吸光强度(570nm) 或荧光强度(Lem/ex = 585/530nm）与样本中的总胆固醇浓度成正比。检测范围：比色法10-1000mg/L胆固醇；荧光法2到100 mg/L胆固醇。
应用
可直接检测血清、血浆与其它生物样本中的胆固醇含量。
试剂盒组成与保存
缓冲液：20 mL -20°C保存
酶试剂：120 μL -20°C保存
显色剂: 120 μL -20°C保存
标准品：1 mL 3000 mg/L -20°C保存
比色法检测步骤
在检测前应将所有试剂置于室温。血清与血浆样品应当透明，无浑浊和沉淀；若有沉淀则需过滤或离心除去。样品在-20 至-80 °C 可存放一年以上。
1. 标准曲线：先将8 μL 3000 mg/L的标准品与232 μL缓冲液混合，配成10倍浓度为1000 mg/L的预混液。按下表比例用缓冲液进一步稀释标准品，将稀释的标准品各取50μL加入透明96孔板。
标号 | 标准品 + 缓冲液 | 容量 | mg/L |
1 | 100μL + 0μL | 100μL | 1000 |
2 | 60μL + 40μL | 100μL | 600 |
3 | 30μL + 70μL | 100μL | 300 |
4 | 0μL + 100μL | 100μL | 0 |
样品：先将样品稀释10倍（例如将10 μL样品与90 μL缓冲液混合）。取50μL稀释后的样品溶液加入96孔板。
2. 按照每孔需缓冲液55 μL、酶试剂1 μL、显色剂1 μL的比例，为所有反应孔配制足量工作试剂，并在每个标准品与样品孔中加入50 μL反应试剂，轻拍使其混合。、
3. 室温下培养30分钟，在570nm波长下读取OD值。
备注：若样品的OD值比100 mg/dL标准品的OD值高，需用缓冲液将样品再稀释并重复检测，所得结果需乘稀释系数。
荧光法检测步骤
1. 使用荧光测定法时，线性测量范围为2 到100mg/dL 胆固醇。将比色检测过程中制备的标准品再用缓冲液稀释10倍成为0, 30, 60, 100 mg/L胆固醇。
2. 取黑色96孔板，将50 μL标准品与50 μL样品加入不同孔。
3. 每孔加入50 μL反应试剂(见比色法)，轻拍孔板使其混合。
4. 在室温下反应30分钟，在Lem = 585nm，Lex = 530nm的条件下读取荧光值。
浓度计算
用标准品的值R标准品 减去空白对照值R空白(缓冲液，4号)，对标准品浓度作图得出斜率。样品的胆固醇浓度计算如下：
备注：由于标准品与样品溶液都已稀释10倍，故此处无需再乘稀释因子。
注意事项：本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。
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