
产品说明
甘油三酯是植物油、动物脂肪、低密度脂蛋白 (LDL) 和极低密度脂蛋白 (VLDL) 的主要成分,作为脂肪酸的转运蛋白以及能量来源发挥着重要角色。 TG 分解为脂肪酸和甘油,之后两者可作为能量产生和代谢途径的底物。高水平的甘油三酯与动脉粥样硬化、心脏病、中风以及胰腺炎有关。在科研和药物研究中,方便、直接、自动化的甘油三脂含量检测手段获得了广泛的应用。本公司研制的甘油三脂检测试剂盒采用一种工作试剂,将甘油三脂的分解与甘油含量的测定合并到同一步骤。在此过程中染色剂氧化生成有色产物,在波长为570nm下检测,其颜色深浅程度与样品中甘油三脂的含量成正比。检测范围为0.01-1.0 mmol/L 。
产品用途
直接检测血清、血浆等生物样品中甘油三脂的含量。
试剂盒组成与保存
缓冲液:12 mL -20°C保存
ATP:120 μL -20°C保存
显色剂:120 μL -20°C保存
混合酶:250 μL -20°C保存
脂肪酶: 500 μL -20°C保存
标准品: 100 μL -20°C保存
检测步骤
注意:(1) 含有硫氢基的试剂(如:硫氢乙醇,DTT)可能影响检测,样品准备中避免此类物质。(2) 如果样品中含有甘油,也可使用本试剂盒先测定甘油浓度,再减去甘油值便得到甘油三酯浓度。
1、将所有试剂放置至室温,解冻后的混合酶和脂肪酶应置冰上或冰箱保存。用蒸馏水稀释标准品。稀释比例见下表:
标号 | 标准品+H2O | 终量(μL) | 甘油三脂 (mmol/L) |
1 | 10 μL+ 990 μL | 1000 | 1.0 |
2 | 6 μL + 994 μL | 1000 | 0.6 |
3 | 3 μL + 997 μL | 1000 | 0.3 |
4 | 0 μL + 1000 μL | 1000 | 0 |
取透明平底96孔板,在孔中分别加入10 μL不同浓度的标准品。
样品处理:检测前,血清和血浆样品需用蒸馏水稀释5倍,细胞和其它固体样品需用5%的曲通(Triton X-100)溶液溶解。大多数样品(如血清和血浆)不含甘油,不需作样品的空白对照。若样品含有甘油,则需空白对照。
将10 μL样品(和10 μL作为空白对照的样品)分别放入96孔板的孔中。
2、取洁净试管,按如下 比例,配制足量的反应试剂。反应试剂: 100 μL 缓冲液,2 μL混合酶, 5 μL脂肪酶,1 μL ATP, 1 μL显色剂。
在标准品和样品孔中加入100 μL反应试剂。轻敲使其混合。
3、在室温下培养30分钟,在570nm下读取吸光度。
注意:如果样品的OD值大于1.0 mmol/L标准品的OD值,用蒸馏水稀释样品并再次检测,结果需乘稀释系数n。
浓度计算
用OD标准品减去OD水(标号4)得到△OD,以此对标准品浓度作图,测定其斜率并计算样品中甘油三脂的浓度。
预防措施:本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。