产品说明

 检测原理：通过酶偶联反应检测脂肪分解终产物甘油的含量，颜色深浅与甘油量成正比。

产品特点

灵敏、准确：检测只需10 μL样本。甘油的线性检测范围：比色法0.92- 100 μg /mL (10 -1000μM)；荧光法0.2-5μg /mL(2 - 50μM)。

简便、快速：整个检测过程只需加入一种工作试剂，并在室温下反应20分钟。

高通量：在570nm条件下，极大地降低了药物的潜在干扰，并能兼容培养基中的酚红。检测适用96孔板或384孔板。

适用范围

1. 能够直接检测细胞培养物内的甘油含量，从而分析脂肪水解程度。

2. 在药物和药理研究中，检测药品对脂肪水解的影响。

试剂盒组成(96孔板供100份测试)：

缓冲液：12 mL             酶试剂：250 μL     

ATP：120 μL                显色剂：120 μL      

标准品：100μL            100mM 甘油

储运条件：试剂盒需冰袋运输，缓冲液在4°C贮存，其他试剂在-20°C 贮存。

预防措施：本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。

比色法检测步骤

样品中应避免含有-SH基团的干扰试剂(如巯基乙醇，DTT)。检测前， 将所有试剂放置至室温。在检测过程中将解冻的酶试剂置冰上或冰箱内保存。

1．细胞培养：将细胞(如前脂肪细胞，脂肪细胞等)置于培养板内(24孔板，96孔板或384孔板)培养。如需进行药物试验，则用待测药物处理细胞并培养相应时间(注：细胞及待测药物须自行准备，本试剂盒并未提供)。

2．标准品与样品：将10 μL标准品(100 mM)与910 μL培养基(与细胞培养相同)混合，得到100 μg/mL的标准品。按下表比例稀释标准品，并各取10 μL放入透明平底的96孔板中(或取5 μL放入384孔板中)。 

从细胞培养孔中收集上清液(样品需立即检测或于-20°C 贮藏)，取10 μL样品(或5 μL用于384孔板)，放入检测板上的不同孔中。

3．显色反应：取洁净试管，按如下比例为每检测孔配制足量的工作试剂：100μL缓冲液，2μL酶试剂，1μL ATP，1μL染色剂。将100μL工作试剂加入各检测孔(或50μL于384孔板)，轻拍使其混合。

4. 室温下反应20分钟后，在570nm (550-585nm)下读取吸光度。

荧光法检测步骤

标准品：仿比色法稀释标准品，并各取10μL与190μL蒸馏水混合。混合后的甘油浓度分别为5.0、3.0、1.5 和 0 μg/mL。

样本：取10μL 细胞培养上清液，加入190μL 蒸馏水稀释(稀释系数为 n = 20)。

取 5μL 稀释后的标准品与样品，放入黑色96孔板或384孔板的不同的孔中。加入50μL 工作试剂，轻拍使其混合。室温下反应20分钟，在l_ex = 530nm 和 l_em = 585nm下读取荧光值。

浓度计算：

用标准品的值R标准品 减去空白对照值R空白(缓冲液，4号)，对标准品浓度作图得出斜率。样品的甘油浓度计算如下:

备注：若计算出样品的甘油浓度高于标准品，需用水稀释样品并重复检测，结果需乘稀释系数(n)。

实验必需品(未提供)：吸量管、离心管、适当的96孔或384孔板、酶标仪。