产品说明
甘油又叫丙三醇，是无色味甜澄明黏稠液体。无臭。有暖甜味。能从空气中吸收潮气，也能吸收硫化氢、氰化氢和二氧化硫。难溶于苯、氯仿、四氯化碳、二硫化碳、石油醚和油类。本公司生产的甘油试剂盒仅需添加含有甘油激酶，甘油磷酸氧化酶和显色剂的单一工作试剂。其吸光强度(570nm) 或荧光强度(lem/ex = 585/530 nm）与样品中的甘油浓度成正比。96孔板测试范围10 – 1000 μM 。
适用范围
直接检测：生物样品(如血清和血浆)中甘油的含量。
试剂盒组成与保存
缓冲液: 12 mL -20°C保存
酶试剂: 250 mL -20°C保存
ATP: 120 mL -20°C保存
显色剂：120 mL -20°C保存
标准液: 100 mL 100 mM -20°C保存
比色法检测步骤
注：含有-SH基团的试剂(如巯基乙醇，DTT)可能会影响该测试，应当在样品制备时避免。
1. 将所有试剂放置至室温。将解冻的酶试剂放在冰箱内或冰上。按照下表比例，用蒸馏水稀释标准品（将稀释后的标准品冷却储藏以备日后使用）。
标号 | 标准品 + H2O | 终量 (mL) | (mM) |
1 | 10 mL + 990 mL | 1000 | 1.0 |
2 | 6 mL + 994 mL | 1000 | 0.6 |
3 | 3 mL + 997 mL | 1000 | 0.3 |
4 | 0 mL + 1000 mL | 1000 | 0 |
将10 mL 不同浓度的标准品和10 mL 样品分别加入透明平底96孔板中。
2. 对每个反应孔，按100mL 缓冲液，2mL 酶试剂， 1mL ATP和 1 mL显色剂混合，准备足够反应试剂。 该反应试剂应现配现用。将100 mL反应试剂加入每个孔中，轻敲孔板使其混匀。
3. 室温下培养20分钟。读取570nm处吸光度。
注：若样品的吸光度大于1.0mM标准品的吸光度，需用水稀释样品并重复检测，结果需乘稀释系数 (n)。
浓度计算
用标准品的吸光度减去空白对照(标号4)，对标准品浓度作图并得出斜率。样品的甘油浓度计算如下：
单位换算：1 mM 甘油相当于 92 mg/L。
荧光法检测步骤
对荧光法，线性测试范围是2 - 50 mM甘油。将10 mL 100 mM 标准品和 990 mL 水混合 （预混液浓度为 1 mM)。按照下表稀释标准品。
标号 | 预混液 + H2O | 终量 (mL) | (mM) |
1 | 50 mL + 950 mL | 1000 | 0.05 |
2 | 30 mL + 970 mL | 1000 | 0.03 |
3 | 15 mL + 985 mL | 1000 | 0.015 |
4 | 0 mL +1000 mL | 1000 | 0 |
将10mL 标准品和10mL 样品分别加入黑色96孔板的孔中。
再加入100 mL 反应试剂 (见比色法)。轻敲孔板使其混合。
室温下培养20分钟，读取 lex = 530nm 和 lem = 585nm处荧光强度。
注意事项: 本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。
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