货号：T2212

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产品组分

产品说明

SuperHiFi DNA Polymerase 为定向进化得到的高保真DNA 聚合酶，其保真度是普通Taq 酶的70 倍，扩增速度是Pfu的5 倍。优化的缓冲液中添加了独特的延伸因子和特异性促进因子，使其在长片段扩增能力、扩增特异性以及扩增产量方面得到了大幅度提升。使用λDNA、质粒等简单模板时，SuperHiFi DNA Polymerase可以轻松扩增长达20 kb 的片段；而使用基因组DNA 等复杂模板时，SuperHiFi DNA Polymerase能有效扩增长达12 kb 的片段。此外，SuperHiFi DNA Polymerase对PCR抑制剂具有良好的耐受能力，对粗提样本也能进行很好的扩增。

适用范围

本产品适用于以基因组DNA、cDNA、质粒以及粗品为模板的PCR反应。

使用方式

1、反应体系配置

a: 当扩增片段GC含量>60%且优化条件也无法正常扩增时，推荐使用PCR Enhancer 来优化PCR 反应。程序推荐：Touchdown PCR（降落PCR）程序。

2、推荐模版用量及反应条件

2.1 模版用量

2.2 反应程序

（1）三步法：

a. 对于普通模板，预变性可缩短至30~60s；对于复杂模板，例如高GC序列，推荐延长预变性时间到3~5min以充分变性；

b. 根据引物Tm值设置退火温度。如引物Tm值≥72°C，可删除退火步骤，直接进行后续的延伸步骤(两步法PCR)。如果需要，可以建立一个温度梯度寻找引物与模板结合的最适温度。此外，退火温度直接决定扩增特异性。如发现扩增特异性差，可适当提高退火温度；

c. 对于大多数模板，30s/kb即可有效扩增；对于一些复杂模板，可延长延伸时间至30~60s/kb。

（2）两步法：

通常情况下使用两步法和三步法进行PCR 扩增，性能无显著差异，可以根据操作习惯自行选择。但对于一些复杂模板（如长片段，Tm 分布不均匀, 特殊结构模板），可以尝试两步法或者Touchdown PCR（降落PCR）法。此外，使用质粒为模板进行点突变时，也建议使用两步法。

（3）Touchdown PCR（降落PCR）法： 

该程序仅供参考，Touchdown PCR（降落PCR）有多种程序可灵活调整，请根据实验需求与习惯自行决定是否采用。

注意事项

1. 请不要使用含尿嘧啶的引物和模板。

2. SuperHiFi DNA Polymerase 具有较强的校正活性，产生的扩增产物是平末端，如果用于下一步克隆实验，建议使用平末端克隆。如果扩增产物需要用于TA 克隆，加A 之前须先进行DNA 纯化。

3. 为了提高扩增成功率和产量，请使用高质量的模板。