产品货号：C0488-100 μL ：1 mM in DMSO
储存条件：-20℃避光干燥保存，有效期见外包装。
产品介绍
SuperView™ 488 Caspase-3 Substrate 基于 caspase-3/7 活力检测细胞凋亡提供了有效的工具，适用于荧光显微术和流式细胞术。相比其他基于（FLICA）分析的 caspase 的荧光底物或荧光抑制剂，SuperView™ 488 Caspase-3 Substrate 检测 caspase-3/7 活性的同时不会抑制完整细胞的凋亡过程。Substrate 由耦合 caspase-3/7 DEVD 识别序列的荧光 DNA 染料组成。Substrate 最初无荧光，穿过细胞膜进入细胞质。在凋亡细胞中，caspase-3/7 剪切 Substrate， 释放高亲和性的DNA 染色，这种染料迁移到细胞核标记 DNA 并发出明亮的绿色荧光。因此 SuperView™ 488 Caspase-3 Substrate 是双功能的，既可以检测 caspase-3/7 活性，又可视化细胞核在细胞凋亡进行中的形态学变化。SuperView™ 488 染色可以甲醛固定并兼容后续免疫染色实验。SuperView™ 488 Caspase-3 Substrate 提 供 DMSO 和 PBS 两种溶解形式。PBS 形式可用于对 DMSO 毒性敏感的细胞，在对 DMSO 不敏感的细胞类型中，添加 DMSO 溶解形式可增强、SuperView™ 488 的孵育染色效果。
光谱特性
SuperViw™ 488：Ex/Em = 500/530 nm (with DNA)
使用方法
1. 实验优化
下面提供的实验步骤根终点法检测制度。SuperView™ 488 Substrate 也可以进行细胞长时间孵育研究（详见后“常见问题”）。细胞密度、底物浓度和抑制剂浓度可能需要优化。最佳底物浓度可能在 1-10 μM 之间。细胞可以在培养基、PBS 或其他您所选择的缓冲液中孵育底物。对于贴壁细胞，我们建议更换新鲜含有底物的培养基，以防背景的不均一性。底物孵育后换液或洗涤细胞的操作是自由选择的。
2. 对照
我们建议您设定以下对照：
A.阴性对照：不诱导凋亡的细胞
B.阳性对照：诱导凋亡的细胞
3. 流式细胞术
（1）选择合适的方法诱导细胞凋亡，未经处理的细胞样本作为对照。
（2）贴壁细胞，进行 SuperView™ 488 Caspase-3 实验前先用胰蛋白酶或其他方法消化细胞。
（3）用培养基或缓冲液重悬细胞，使细胞密度为 106/mL。
（4）吸取 0.2 mL 细胞悬液至流式细胞试管。
（5）往 200 μL 细胞悬液中加入 1 μL 1 mM 的 Substrate 并立即混匀使底物浓度为 5 μM。不同细胞的最佳底物浓度可能不同，需分析优化。
（6）室温避光孵育细胞 15-30 min。
（7）加入 300 μL 培养基或 PBS，流式细胞仪分析。检测绿色荧光的通道（激发/发射：485/515 nm）。
4. 荧光显微镜
（1）选择合适的方法诱导细胞凋亡，未经处理的细胞样本作为对照。
（2）用含有 5 μM Substrate 的新鲜培养基或 PBS 对细胞进行换液（见试验优化）。
（3）室温下孵育细胞 30 min 或更长时间。
（4）细胞可以在含有 Substrate 的培养基中直接观察。对于终点分析法，PBS 清洗细胞，荧光显微镜观察细胞，使用观察绿色荧光的滤片（激发/发射：485/515 nm）。
5. 荧光酶标仪
（1）贴壁细胞在黑色 96 孔板中进行培养；悬浮细胞，调整密度至 106 cells/mL，0.2 mL 细胞悬液分装到一孔。
（2）选择合适的方法诱导细胞凋亡，未经处理的细胞样本作为对照。注意：细胞可以在管或瓶中处理，然后转移到 96 孔检测板。
（3）对于悬浮细胞，直接添加 Substrate 混匀。对于贴壁细胞，用含有 5 μM Substrate 的新鲜培养基或 PBS 对细胞进行换液（见试验优化）。
（4）室温避光孵育细胞 15-30 min。
（5）对于悬浮细胞，轻轻摇晃重悬细胞。荧光酶标仪设置激发波长 488 nm 和发射波长 520 nm。建议贴壁细胞使用底部采集方式。贴壁细胞密度的变化可能导致不准确的读数。
注意事项
1、细胞可以用终浓度为1μM 的 Hoechst 33342 染料共同染色，使细胞核产生蓝色荧光染色（激发/发射：346/460 nm）。
2、SuperView™ 488 染色可以被甲醛固定，但与甲醇固定不兼容。
3、甲醛固定的 SuperView™ 488 染色细胞可以用 0.1% Triton X-100 处理后进行后续染色，但这样处理后的染色的亮度可能会减弱。
