产品货号：S1080

储存条件：2~8°C

一、产品简介

Strep-Tag II为8个氨基酸构成的短序列(WSHPQFEK) ，由于标签小，仅为1.06 KDa左右，不影响融合后蛋白质的结构和功能，不与重金属离子反应，不具有离子交换特性，也不会引起蛋白聚集。这些温和的纯化参数能，保持蛋白质的生物活性，首次纯化后无需去除Strep-TagII并仅经一步提取即可产出超过99%纯度的蛋白质。由于其高亲和力，单步纯化纯度高(优于His标签)，纯化条件温和，蛋白两端均可融合等突出特点迅速得到了广泛应用。

Streptavidin标签亲和填料是将Steptactin偶联至高度交联的4%琼脂糖微球上，可用于各种表达系统，包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌中含有Strep-Tag II和Twin Strep-Tag II蛋白纯化。适用于大部分蛋白质性质，方便蛋白质和蛋白质之间相互作用分析。

二、技术指标

三、操作说明

Streptavidin标签亲和填料可以在实验室被填装到lablead中压层析柱中，以扩大产量。将填料填装到层析柱中，根据样本量和填料载量选择合适的层析柱和柱高。

3.1缓冲液的准备

所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

平衡缓冲液:

100mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM EDTA，pH8.0或PBS:20mM磷酸钠，280mM NaCl，6 mM氯化钾，pH7.4

洗脱缓冲液:

平衡液中加入50mM d-Biotin，100mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM EDTA，pH8.0。

3.2样品准备

样品在上样前建议离心或用0.22 um或0.45 um滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3.3样品纯化

1) 用3~5CV的去离子水冲洗出储存缓冲液。

2) 使用至少5CV的平衡液平衡色谱柱。

3) 利用泵或样品环上样。注：样品的粘度增加使得即使样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。

4) 用平衡缓冲液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10 ~15CV)。

5) 使用5~10CV的洗脱液洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

6) 介质洗脱结束后，用平衡液冲洗5~10CV，然后用纯水冲洗5-10CV，再用20%乙醇冲洗2个CV，置于2~8°C保存。

重要提示：如果使用Xtrap预装柱，可省略装柱步骤。

4在位清洗

4.1洗脱液为脱硫生物素时，

用5倍柱体积( CV )的去离子水清洗，用15 CV的含1mM HABA的平衡液再生，然后用30 CV的平衡液清洗。脱硫生物素被黄色溶液HABA取代，后者一旦与Streptactin复合即变为红色。HABA随后被平衡液除去，柱子可重新使用。

4.2洗脱液为D-生物素时，

用5 CV的去离子水清洗，用15CV 1MNaOH再生，然后用30 CV的平衡液清洗。