产品货号 ：S1180

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一、产品简介

Strep-Tag II为8个氨基酸构成的短序列(WSHPQFEK) ，由于标签小，仅为1.06 KDa左右，不影响融合后蛋白质的结构和功能，不与重金属离子反应，不具有离子交换特性，也不会引起蛋白聚集。这些温和的纯化参数能，保持蛋白质的生物活性，首次纯化后无需去除Strep-TagII并仅经一步提取即可产出超过99%纯度的蛋白质。由于其高亲和力，单步纯化纯度高(优于His标签)，纯化条件温和，蛋白两端均可融合等突出特点迅速得到了广泛应用。

Strep-tag是一种在蛋白纯化系统中广泛应用的亲和标签，包括Strep-tag II和Twin Strep-tag II两种类型。Strep-tag II为8个氨基酸构成的短序列（WSHPQFEK），可在N端或C端与蛋白质融合，对重组蛋白的影响很小。Twin Strep-tag II是顺序排列的两个Strep-tag II序列，该标签能够像Strep-tag II一样进行快速温和的纯化。

小分子化合物生物素（Biotin）与（链霉）亲和素间具有极高的亲和力，生物素标签可以应用于蛋白质标记，富集，介质固定化，功能化以及形成聚合物或桥接分子等。然而链霉亲和素与生物素之间的极高亲和力导致富集后存在特异性洗脱比较困难的问题。

TM Streptavidin亲和填料是将Steptactin的突变体偶联至高度交联的4%琼脂糖微球上，该突变体与Biotin或Strep-Tag II和Twin Strep-Tag II的亲和力在μg/ml范围内。TM streptavidin亲和填料可在生理条件下纯化Biotin标记或Strep-Tag II和Twin Strep-Tag II融合的重组蛋白，可以直接用1-10 mM D-Biotin竞争洗脱，单步纯化纯度可高达99%的纯度(优于His标签)。样品中低浓度(50 μmol/L)的D-生物素不会影响目的蛋白和TM Streptactin Beads的结合效果。该产品在使用后可直接用平衡缓冲液再生，或者使用10-50 mM NaOH进行一定程度的清洗再生。

二、技术指标

三、操作说明

Streptavidin标签亲和填料可以在实验室被加入到离心管中孵育纯化，或填装到重力柱或中压层析柱中，进行柱纯化。将填料填装到层析柱中，根据样本量和填料载量选择合适的层析柱和柱高。

3.1缓冲液的准备

所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

平衡缓冲液:

100mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM EDTA，pH8.0或 PBS:20mM磷酸钠，280mM NaCl，6 mM氯化钾，pH7.4

洗脱缓冲液:

平衡液中加入5-50mM D-Biotin，100mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM EDTA，pH8.0。

3.2样品准备

样品在上样前建议离心或用0.22 um或0.45 um滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3.3样品纯化

1) 用3~5CV的去离子水冲洗出储存缓冲液。

2) 使用至少5CV的平衡液平衡色谱柱。

3) 利用泵或样品环上样。注：样品的粘度增加使得即使样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。

4) 用平衡缓冲液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10 ~15CV)。

5) 使用5~10CV的含5-10 mM 生物素的洗脱液洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

6) 介质洗脱结束后，用平衡液冲洗5~10CV，然后用纯水冲洗3 CV，再用20%乙醇冲洗2个CV，置于2~8°C保存。

重要提示：如果使用Xtrap预装柱，可省略装柱步骤。

4在位清洗

4.1继续纯化同一目的蛋白时，

用5-15 CV的含平衡液洗柱，柱子可重新使用。

4.2当纯化不同蛋白或突变体时，

用3 CV的去离子水清洗，用5-15CV- 10-50 mM NaOH再生，然后用3 CV的去离子水清洗。

Fig1. MT Streptactin beads从裂解液中纯化Biotin标记的GFP蛋白。

Fig2. MT Streptactin beads从裂解液中纯化Twenstrep-GFP蛋白。

Fig3. MT Streptactin beads用不同浓度Biotin洗脱纯化Twenstrep-GFP蛋白的效果。

Fig4. MT Streptactin beads富集和用5mM生物洗脱strep和Twinstrep融合蛋白的效果。

Fig5-6. MT Streptactin beads纯化Twenstrep-GFP蛋白过程中对Urea，SDS及生物素的耐受。

Fig7-9. MT Streptactin与Streptactin和Streptactin XT纯化效果的对比。

Fig10-11. MT Streptactin beads对1μg Twinstrep-eGFP的回收效果。

Fig12-13. MT Streptactin beads纯化Bio-eGFP和Twinstrep-eGFP蛋白，用缓冲液清洗再生使用情况。