产品货号：T2130
储存条件：-20°C 避光保存，有效期一年，使用前请轻轻混匀。
产品介绍
LabFect Prime具有非常优异的转染性能，可高效转染绝大多数原代细胞，转染效率可高达85%以上（EGFP质粒）。LabFect Prime Transfection Reagent功能强大，不仅可高效转染较大分子的质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，LabFect Prime 采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后24小时细胞几乎无明显死亡。LabFect Prime使用也非常方便，先将转染试剂与质粒DNA混合，再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。
产品特点
卓越的细胞转染性能：可高效转染多种原代细胞，转染效率在原代细胞中可高达85%以上；
转染功能强大，不仅可高效转染大分子质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA；
极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；
操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。
操作步骤：
一、质粒DNA转染（以24孔板转染为例）:
A. 细胞接种：
1. 转染前一天对细胞进行转接，每孔接种0.8-1.2×10 5个细胞，使转染时细胞密度为90%左右，且生长良好（非常重要）；
2. 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
B. LabFect Prime/DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染)：
1. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并加入适量的溶液A，轻轻混匀，再加入适量的DNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀 后在室温静置5分钟。
3. 将DNA-培养基混合物滴加至LabFect Prime培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。注意：LabFect Prime-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。
注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。
C. 转染：
1. 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2. 培养12小时后即可观察，最佳观察或收获时间为24~48小时。
3. LabFect Prime在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。
二、siRNA转染（以24孔板转染为例）:
A. 细胞接种：
1. 转染前一天对细胞进行转接，使转染时细胞密度为30-50%左右，且生长良好、无支原体污染（非常重要）；
2. 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
B. LabFect Prime /siRNA转染复合物制备 (该步完成后应立即转染):
1. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的siRNA（见下表），用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3. 将siRNA-培养基混合物滴加至LabFect Prime-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。
C. 转染：
1. 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2. 37°C培养24-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。
3. LabFect Prime在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。
注意事项：
1. 首次转染，请务必进行优化实验，如24孔板质粒转染，每孔质粒用量0.8ug，LabFect Prime可选择2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul进行优化。24孔板siRNA转染，LabFect Prime用量2ul，siRNA用量可选10pmol、20pmol、30pmol、40pmol进行优化。
2. 进行质粒转染，接种细胞的数量应以确保转染时的细胞汇合度在80-90%为准，过高或过低均会影响转染效率。进行siRNA转染，接种细胞 的数量应以确保转染时的细胞汇合度在30-50%为准。在制备DNA或siRNA转染复合物时，应避免体系中存在血清（推荐DMEM）。培养体 系中尽量不要添加抗生素，抗生素会导致培养细胞死亡。
3. 溶液A仅用于质粒转染，RNA或siRNA转染不需加入溶液A。
4. 请注意质粒转染和siRNA转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异，不要混用同一条件。
5. 如果需要质粒稳转，请在转染24-48h后加入筛选培养基。
6. 本产品适合于质粒DNA、siRNA分别独立转染，如需质粒DNA、siRNA共转，请选用LabFectCO Prime核酸共转染试剂盒。
附表 1：质粒转染不同培养体系推荐初始转染条件
培养皿 | 96 孔板 | 48 孔板 | 24 孔板 | 12 孔板 | 6 孔板 | 10cm 皿 | |
培养基、 试剂、 DNA量 | 无血清培养基(μl) | 2x10 | 2x25 | 2x50 | 2x100 | 2x200 | 2x1000 |
溶液 A(μl) | 0 4 | 1.0 | 2 0 | 4.0 | 8 | 40 | |
LabFect SP Prime (μl) | 0.5 | 1.3 | 2.5 | 5.0 | 10 | 50 | |
1μg/ μl plasmid (μl) | 0. 16 | 0.4 | 0.8 | 1.6 | 3.2 | 16 | |
完全培养基(ml) | 0. 10 | 0.25 | 0.50 | 1.0 | 2.0 | 10 | |
附表 2 ：siRNA 转染不同培养体系推荐初始转染条件
培养皿 | 96 孔板 | 48 孔板 | 24 孔板 | 12 孔板 | 6 孔板 | 250px 皿 | |
培养基、 试剂、 DNA 量 | 无血清培养基(μl) | 2x10 | 2x25 | 2x50 | 2x100 | 2x200 | 2x1000 |
LabFect SP Prime(μl) | 0.4 | 1.0 | 2.0 | 4.0 | 8.0 | 40 | |
siRNA (pmol) | 4 | 10 | 20 | 40 | 80 | 400 | |
完全培养基(ml) | 0. 10 | 0.25 | 0.50 | 1.0 | 2.0 | 10 | |
适用细胞系：小鼠软骨细胞，大鼠软骨细胞，人关节软骨细胞，人 肺静脉内皮细胞，人脐静脉内皮细胞，小鼠肺成纤维细胞，人肺癌 上皮细胞，人乳腺癌上皮细胞，人结肠癌细胞，人气管上皮细胞， 人肝癌细胞，人宫颈癌上皮细胞，前列腺癌上皮细胞，大鼠肺静脉 平滑肌细胞，人肺动脉平滑肌细胞，大鼠心肌细胞，人纤维肉瘤细 胞，大鼠骨骼肌细胞，人横纹肌肉瘤细胞，人胶质母细胞瘤细胞， 人黑色素瘤细胞，人神经母细胞瘤细胞，小鼠肝癌细胞，小鼠胚胎 成纤维细胞，等等。
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