货号：T2116

储存条件：蓝冰运输，2-8°C 保存，有效期一年，使用前请轻轻混匀。

产品描述

Labfect Prime 具有非常卓越的转染性能，可高效转染绝大多数贴壁细胞，转染效率可高达 90%以上（Hela 细胞，EGFP 质粒）。LabfectPrime 功能强大，不仅可高效转染较大分子的质粒 DNA，还可高效转染 mRNA、siRNA、mimics 和各种小分子 DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，Labfect Prime 采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后 24 小时细胞几乎无明显死亡。Labfect Prime 使用也非常方便，先将转染试剂与质粒 DNA 混合，再将转染试剂-DNA 复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。Labfect Prime 适合于贴壁细胞的核酸转染，如需转染原代细胞，请选择 LabfectPM Prime 原代细胞核酸转染试剂盒。如需转染悬浮细胞，请选择 LabfectSP Prime 悬浮细胞核酸转染试剂盒。

产品优点

1、卓越的细胞转染性能：可高效转染多种贴壁细胞，转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上；

2、转染功能强大，不仅可高效转染大分子质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA；

3、极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；

4、操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。

操作步骤：

一、质粒DNA转染（以24孔板转染为例）:

A. 细胞接种:

1. 转染前一天对细胞进行转接，每孔接种1.5-2.0×105个细胞，使转染时细胞密度为90%左右，且生长良好（非常重要）；

2. 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。

B. Labfect /DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):

1. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

2. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并加入适量的溶液A，轻轻混匀，再加入适量的DNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀

后在室温静置5分钟。

3. 将DNA-培养基混合物滴加至Labfect-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。注意： Labfect-培养基混

合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。

注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。

C.转染:

1. 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。

2. 培养12小时后即可观察，最佳观察或收获时间为24~48小时。

3. Labfect在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。

二、siRNA转染（以24孔板转染为例）:

A. 细胞接种:

1. 转染前一天对细胞进行转接，使转染时细胞密度为30-50%左右，且生长良好、无支原体污染（非常重要）；

2. 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。

B. Labfect /siRNA转染复合物制备 (该步完成后应立即转染):

1. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

2. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的siRNA（见下表），用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

3. 将siRNA-培养基混合物滴加至Labfect-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。

C.转染:

1. 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。

2. 37°C培养24-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。

3. Labfect Prime在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。

注意事项：

1. 首次转染，请务必进行优化实验，如24孔板质粒转染，每孔质粒用量0.8ug，Labfect Prime可选择2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul进行优化。24孔板 siRNA转染，Labfect Prime用量2ul，siRNA用量可选10pmol、20pmol、30pmol、40pmol进行优化。

2. 在制备DNA或siRNA转染复合物时，应避免体系中存在血清，因血清会干扰Labfect与DNA或siRNA形成复合物。培养体系中尽量不要添加抗生素，抗生素会导致培养细胞死亡。

3. 溶液A仅用于质粒转染，RNA或siRNA转染不需加入溶液A。

4. 请注意质粒转染和siRNA转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异，不要混用同一条件。

5. 如果需要质粒稳转，请在转染24-48h后加入筛选培养基。

6. 本产品适合于质粒DNA、siRNA分别独立转染，如需质粒DNA、siRNA共转，请选用Labfect Prime核酸共转染试剂盒。

注意事项

本产品仅用于科研。

附表1: 质粒转染不同培养体系推荐初始转染条件

附表2: siRNA转染不同培养体系推荐初始转染条件