货号：T2120

存储条件：: 近期使用4-8℃保存，长期保存-20℃。每次使用之前请先将本品上下颠倒混匀。

产品说明：

LabFect Plasmid原代细胞小核酸转染试剂是专门用于原代细胞质粒DNA转染的转染试剂。LabFect Plasmid 具有非常卓越的转染性能，可高效转染多种原代细胞，转染效率高达85% 以上（EGFP质粒）。LabFect Plasmid不仅可转染较大分子的质粒DNA，还可转染RNA和小分子DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，LabFect Plasmid 采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后细胞死亡率不到10%。LabFect Plasmid 使用也非常方便，先将转染试剂与质粒DNA混合，再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。。

产品特点：

卓越的细胞转染性能：可高效转染多种原代细胞，转染效率高达85%以上；

极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响，实验结果更为客观；

操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。

注意事项：

转染前的细胞汇合度以90%左右为宜，转染时细胞生长状态应保持良好，不要有支原体污染。

首次转染，建议进行优化实验，如24孔培养板，每孔质粒用量0.8ug，转染试剂用量可选择2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul进行优化。

应避免转染复合物制备体系中存在血清，因血清会干扰LabFect与DNA形成复合物。转染所用培养基尽量不要使用抗生素，抗生素会导致培养细胞死亡。

适用细胞系：小鼠软骨细胞，大鼠软骨细胞，人关节软骨细胞，人肺静脉内皮细胞，人脐静脉内皮细胞，小鼠肺成纤维细胞，人肺癌上皮细胞，人乳腺癌上皮细胞，人结肠癌细胞，人气管上皮细胞，人肝癌细胞，人宫颈癌上皮细胞，前列腺癌上皮细胞，大鼠肺静脉平滑肌细胞，人肺动脉平滑肌细胞，大鼠心肌细胞，人纤维肉瘤细胞，大鼠骨骼肌细胞，人

横纹肌肉瘤细胞，人胶质母细胞瘤细胞，人黑色素瘤细胞，人神经母细胞瘤细胞，小鼠肝癌细胞，小鼠胚胎成纤维细胞，等等

方法步骤（以24孔板转染为例）:

1. 细胞接种:

a. 转染前24小时左右对细胞进行铺板（不含抗生素），培养过夜； 

b. 确保转染时细胞密度达90%左右。

c.  最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。

2. LabFect/DNA复合物包装(该步完成后应立即转染):

a. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl Trans buffer，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。 

b. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl Trans buffer，轻轻混匀，再加入适量的DNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。

c. 将DNA-Trans buffer混合物滴加至LabFect -Trans buffer混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。注：LabFect - Trans buffer和DNA- Trans buffer的混合次序非常重要，切勿颠倒。

注：离心管最好使用聚丙烯离心管

3. 转染:

a. 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。

b. 培养12小时后即可观察，最佳观察或收获时间为24~48小时。

c. LabFect 在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。如果转染后需要更换新鲜培养基，请于加入LabFect /DNA复合物12~24小时后进行。。

注意：

本产品仅用于科研实验

附表：不同培养体系推荐初始转染条件