货号：YT0015-200T

储存条件：-Carrier DNA -20 ℃保存，其它组分可室温保存，未开封有效期 24 个月。

产品组分：

产品说明：

lablead 出品的经典酵母转化试剂盒主要用于酿酒酵母质粒转化实验，该试剂盒遵循广大用户的使用习惯，分别提供 PEG、LiAc 和 Carrier DNA 溶液，PEG、LiAc 均经过滤除菌，Carrier DNA 经特殊优化处理，更有助于提高质粒 DNA 的转化效率。该试剂盒可根据实际需要灵活配制 1 × LiAc 溶液和转化预混液， 既方便使用，又经济实惠。

本产品在原先试剂盒上进行了升级，增加了感受态冻存液，感受态保存 6-12 个月还可以保证较高的转化效率。

感受态细胞制备：

1. 活化菌种。-80 ℃保存的菌种在 YPDA 培养基平板上划线，30℃培养 2-4 天。

2. 挑取酵母单菌落在 YPDA 培养基平板上划 3-5 mm 的短线，30℃培养 2-4 天。

注意：冻存半年以内的酵母菌，活化一次即可。

3. 待酵母单菌落长至直径2 mm 时，把酵母细胞接种到3 mL YPDA液体培养基中，30℃过夜培养。

4. 第二天转接到含有 50 mL YPDA 液体培养基的三角瓶中继续培养，待OD600达到 0.5-0.8，4000 rpm离心5 min，弃上清。

5. 沉淀用 30 mL 的无菌的去离子水悬浮。4000 rpm 离心 5 min，弃上清。

6. 沉淀用 1.5 mL 1 × LiAc（150 μL 10 × LiAc Solution 加 1350 μL 无菌水）重悬后转移至1.5 mL 离心管中，4000 rpm 离心 5 min，弃上清。

注意：10×LiAc Solution 经过 pH 缓冲，无需添加 TE 作为缓冲剂

7. 加入1 mL感受态冻存液/Y2 溶液重悬，小体积转化按照每管50 μL分装于1.5 mL 无菌冻存管，转文库按600 μL 分装，感受态细胞即制备完毕，可直接用于转化或按下述方案冻存。

8. 制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后，再置于-80 ℃冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒，或用多层纸包裹放入泡沫盒中，先置于-80 ℃冰箱过夜后，再取出感受态置于-80℃冰箱，可保存一年。使用前室温融化后用于转化。

转化预混液配制：

酵母质粒转化：

1. 将 310 μL 预混液加入 1 支感受态细胞中，反复吹吸沉淀，使酵母细胞彻底悬浮于预混液中。

2. 30 ℃的水浴锅中孵育 30 min，每 10 min 混匀一次。

3. （加入 20 μL DMSO，可选）42 ℃的水浴锅中热击 30 min，每 10 min 混匀一次。

4. 12000 rpm 离心 15 s，弃上清液。

5. （可选步骤）用 1 mL YPD Plus Liquid Medium 重新悬浮，30℃摇床震荡培养 30-60 min。12000 rpm离心15 s，弃上清液。

6. 加入 0.1-1 mL 无菌去离子水或 0.9%氯化钠溶液重悬沉淀，涂筛选培养基平板，30℃培养2-4天。

酵母文库转化：（需用 15-50 mL 离心管）

1. 将 2170 μL 预混液加入到感受态细胞（600 μL）中，震荡使感受态细胞充分重悬。

2. 放置在 30 ℃的水浴锅中孵育 50 min，每 10 min 混匀一次。

3. （加入 160 μL DMSO，可选）放置在 42 ℃的水浴锅中热击 30 min，每10 min混匀一次。

4. 4000 rpm 离心 5 min，弃上清液。

5. （可选步骤）用3 mLYPD Plus Liquid Medium重悬沉淀，30℃摇床震荡培养90 min，4000 rpm离心5min，弃上清液。

6. 加入15 mL无菌去离子水或 0.9% 氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板（50 个平板左右），30℃培养 2-4 天

注意事项

1. 转化全程需无菌操作。

2. 初次使用 Carrier DNA，请把装有 Carrier DNA 的管子在沸水中煮沸 5 min，然后立即放在冰上，用后-20℃储存备用。下次使用前在冰上解冻 Carrier DNA。反复冻融 3-5 次后需重新变性 Carrier DNA。

3. PEG 溶液在低温环境下会析出，请于常温环境下完全溶解后使用。

4. 根据质粒浓度增减体积，增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。