
货号 :TR002
存储条件 :2-8℃保存一年。(避免冷冻)
产品说明
LABLEAD Lipo3000 试剂采用了脂质纳米颗粒(Lipid Nanoparticle)LNP 递送技术, 利用脂质形成纳米微粒将核酸包裹起来形成核酸脂质纳米粒 ,实现高转染性和可重复性的实验结果。其可针对广泛类型的常见及难转染细胞 ,实现超高转染效率 ,同时提供更高的细胞活力。Lipo3000 对大多数细胞毒性低并且性质温和 ,并且我们优化了转染过程的全部四个步骤 ,并结合脂质体纳米颗粒(LNP)递送技术 ,实现了较高的转染性能并可以降低所需的试剂量 ,同时尽可能降低对细胞系产生毒性的风险。对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率 ;转染时血清的存在不影响转染效率的优点。
适用范围 :贴壁细胞和悬浮细胞( 哺乳动物细胞系 )的转染。
产品特点 :
1) 卓越的转染效率—针对较难转染细胞 ,可将效率提升 2~ 10 倍
2) 作用温和 ,细胞毒性低—可改善细胞活力
3) 高性价比高 ,同时实现更好的转染结果
使用方法
DNA 的转染
对大多数细胞来说 ,转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平 ,并能减少细胞毒性。
1. 接种细胞至 70-90%汇合度时转染。
2. 按照下表使用 Opti-MEM 培养基稀释 Lipo3000-B 试剂(建议同时用 2 管) ,充分混匀
3. 使用 Opti-MEM 培养基稀释 DNA ,制备 DNA 预混液 ,然后添加 Lipo3000-A 试剂 ,充分混匀。
4. 在每管已稀释的 Lipo3000-B 试剂中加入稀释的 DNA (1:1 比例)。
5. 室温孵育 5 分钟。
6. 加入 DNA-脂质体复合物至细胞中。
7. 37℃孵育细胞 2-4 天。然后分析转染细胞。
siRNA 转染
转染 siRNA 至细胞中时 ,遵循如上所述的 DNA 实验方案 ,但在稀释 siRNA 时不要加入 Lipo3000-A 试剂(第 3 步)。
细胞培养容器 | 96-well | 24-well | 6-well | 60mm 皿 | 100mm 皿 | |
贴壁细胞 | 1~ 4 ×104 | 0.5 ~ 2 ×105 | 0.25 ~ 1 × 106 | 0.75~3 x10⁶ | 2~8 x10⁶ | |
Opti-MEM 培养基稀释Lipo3000-B 试剂 (建议同时用 2管用于设置梯度) | Opti-MEM 培养基 | 5ul ×2 | 25ul ×2 | 125ul ×2 | 375ul x2 | 1000ul x2 |
Lipo3000-B | 0.15 和 0.3ul | 0.75 和 1.5ul | 3.75 和 7.5ul | 11.25 和 22.5ul | 30 和 60ul | |
Opti-MEM 培养基稀释 DNA ,制备 DNA 预混液 ,然后添加 Lipo3000-A 试剂 ,充分混匀 | Opti-MEM 培养基 | 10uL | 50ul | 250ul | 750ul | 2000ul |
DNA (0.5–5 ug/ul) | 0.2ug | 1ug | 5ug | 15ug | 40ug | |
Lipo3000-A 试剂(2 ul/ug DNA) | 0.4ul | 2ul | 10ul | 30ul | 80ul | |
Lipo3000-B 试剂中加入稀释的DNA (1:1 比例) | 稀释的 DNA | 5ul | 25ul | 125ul | 375ul | 1000ul |
稀释的 Lipo3000-B | 5ul | 25ul | 125ul | 375ul | 1000ul | |
室温孵育 5 分钟 | ||||||
加入 DNA-脂质体复合物至细胞中 | 96-well | 24-well | 6-well | 60mm 皿 | 100mm 皿 | |
DNA-脂质体复合物 | 10uL | 50ul | 250ul | 750ul | 2000ul | |
37°C 孵育细胞 2–4 天。然后分析转染细胞。 | ||||||
以上比例仅供参考,可根据实际情况设置更多比例以便优化实验条件。
特别提醒 :
本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究 ,不得用于临床诊断或治疗 ,不得用于食品或药品 ,不得存放于普通住宅。