货号：TR001
储存条件：2-4℃保存一年。（避免冷冻）
产品说明
Transfection Reagent是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，具有低细胞毒性；对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。
适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。
质粒DNA的转染
对大多数细胞来说，DNA(µg)与Transfection Reagent(µl)的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。
以24孔板为例
贴壁细胞：转染前一天，用500 µl不含抗生素的培养基接种0.5～2×105细胞，使之第二天能达到70-90%汇合。
悬浮细胞：在准备DNA-Lip2000复合物之前，用500 µl不含抗生素的培养基接种4～8×105细胞即可。
对每个转染样品，进行以下操作
a.在eppendorf管里分别加入50 µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA轻柔混匀，制成DNA稀释液。
b.在另一个eppendorf管里分别加入50µl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和2.0 µlTransfection Reagent(注意用前先混匀)，轻柔混匀，制成Transfection Reagent稀释液，室温静置5分钟。
c.将DNA稀释液和Transfection Reagent稀释液混合，轻柔混匀，室温静置20分钟， 形成DNA-Transfection Reagent复合物。DNA-Transfection Reagent复合物在室温下可稳定存在6小时。
d.将DNA-Transfection Reagent复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动,使复合物分散均匀。
e.在37℃ CO2培养箱中培养4-6小时后更换培养基,继续培养18～48小时。
f.如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加 入选择性培养基进行筛选。
质粒DNA转染的优化 为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响，可以对DNA和Transfection Reagent的比例以及细胞密度进行优化，一 般在1:0.5~1:5的范围内优化DNA(µg)和Transfection Reagent (µl) 的比例。
不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及Transfection Reagent用量
细胞 培养板 | 每孔面积 | 培养基用量 | DNA转染 | siRNA | |||
铺 板 培养基用量 | 稀 释 培养基用量 | ||||||
96-well | 0.3 cm2 | 100 ul | 2 × 25 µl | 0.2 µg | 0.5 µl | 5 pmol | 0.25 µl |
24-well | 2 cm2 | 500 ul | 2 × 50 µl | 0.8 µg | 2.0 µl | 20 pmol | 1.0 µl |
12-well | 4 cm2 | 1 ml | 2 × 100 µl | 1.6 µg | 4.0 µl | 40 pmol | 2.0 µl |
6-well | 10 cm2 | 2 ml | 2 × 250 µl | 4.0 µg | 10 µl | 100 pmol | 5 µl |
60-mm | 20 cm2 | 5 ml | 2 × 0.5 ml | 8.0 µg | 20 µl | 200 pmol | 10 µl |
10-cm | 60 cm2 | 15 ml | 2 × 1.5 ml | 24 µg | 60 µl | 600 pmol | 30 µl |
Transfection Reagent转染试剂用于不同细胞转染时用量参考（以96孔板为例）
细胞型号 | 培养基 | 每孔细胞数 | DNA的量 | 转染试剂量 |
293H | DMEM | 3x104 | 0.2 ug | 0.5 uL |
293FH | DMEM | 3x104 | 0.2 ug | 0.5 uL |
293E | DMEM | 3x104 | 0.2 ug | 0.5 uL |
293F | DMEM | 3x104 | 0.2 ug | 0.5 uL |
COS7 | DMEM | 1.5x104 | 0.4 ug | 0.5 uL |
HELA | DMEM | 2x104 | 0.3 ug | 0.5 uL |
Cao2 | MEM | 3.5x104 | 0.3 ug | 0.75 uL |
BHK21 | MEM | 2x104 | 0.2 ug | 0.5 uL |
CHO-DG44 | DMEM+HT+pro | 2x104 | 0.5 ug | 0.5 uL |
RAW264.7 | DMEM | 3x104 | 0.2 ug | 0.5 uL |
MCF7 | MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin +sodium pyruvat | 2x104 | 0.1 ug | 0.25 uL |
SW480 | IMDM | 3x104 | 0.4 ug | 0.5 uL |
MDCK | DMEM | 4x104 | 0.6 ug | 1 uL |
CHO-K1 | IMDM+pro | 3x104 | 0.2 ug | 0.5 uL |
HepG2 | DMEM | 3x104 | 0.5 ug | 0.75 uL |
A549 | DMEM | 2x104 | 0.3 ug | 0.5 uL |
NIH/3T3 | DMEM | 1.5x104 | 0.1 ug | 0.75 uL |
Vero | DMEM | 3x104 | 0.3 ug | 0.75 uL |
Sf9 | SIM SF | 5x104 | 0.4 ug | 0.75 uL |
常见细胞的转染效率
说明书下载
