货号：N30250
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产品说明
LABLEAD的Ni亲和层析介质属于一类金属鳌合介质，以高流速琼脂糖为基质，以IDA、NTA、TED为配基，并鳌合金属离子Ni2+而形成的一种亲和层析介质，因整合方式不同，Ni2+离子结合力也存在细微差距，在对不同蛋白的纯化过程中表现出不同的选择性，广泛用于His标签蛋白的分离纯化，其中Ni-TED beads 6FF可耐受100mM EDTA和10mM DTT。在含有EDTA及DTT的情况下直接进行目的蛋白纯化，此介质的清洗再生工作简单，无需脱镍直接进行NaOH清洗。
技术指标
名称 | Ni-TED beads 6FF |
配基 | 三(甲基)乙二胺(TED) |
基质 | 6%高度交联琼脂糖 |
鳌含量 | 30~60umol/mL |
载量（每ml） | 30mg His标签蛋白 |
平均粒径 | 90um，分布45~165um |
推荐流速 | 150~15000px/h (根据柱子规格选择合适流速) |
最大耐压 | 0.3MPa |
pH稳定性 | 3~12(工作) 2~14(清洗) |
化学稳定性 | 0.01M盐酸、0.01M氢氧化钠(一周) ； 100mM EDTA、10mM DTT、1M 氢氧化钠、8M 尿素、6M盐酸(24小时)； 100mM EDTA、0.5M 咪唑(2小时)；30%异丙醇(20分钟)。 |
应用 | 用于生物制药和生物工程下游蛋白质、及多肽的分离纯化，尤其是组氨酸标记蛋白质的高效制备 |
操作说明
Ni-TED Chromrose 6FF可以在实验室被填装到中压层析柱中，以扩大产量。将填料填装到层析柱中，根据样本量和填料载量选择合适的层析柱和柱高。
1. 缓冲液准备
所用缓冲液需要采用高纯水配制，使用前建议用0.45um滤膜过滤。
平衡缓冲液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，PH=7.4
漂洗缓冲液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，30mM咪唑，PH=7.4
洗脱缓冲液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，500mM咪唑，PH=7.4
2. 样品准备
样品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液进行裂解、透析/超滤/G25进行缓冲液置换。
样品过滤(平均粒径<45um，用0.22um过滤；45um<平均粒径<165um，用0.45um过滤；平均粒径>165um，用0.8um过滤)。
3. 样品纯化
3.1 用3~5CV的纯水冲洗出存储缓冲液；
3.2 用5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱，至流出液电导与pH不变(与平衡液一致)；
3.3 利用泵或者上样环上样；
3.4 上样完毕后用淋洗缓冲液冲洗10~15CV，至基线稳定；
3.5 用洗脱缓冲液采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱一般55CV，梯度洗脱可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积来分离不同结合强度的蛋白；
3.6 依次用3CV平衡缓冲液，5CV纯水，2CV 20%乙醇冲洗层析柱后，置于2~8°C保存。
4. 在位清洗
当填料在使用过程中发现反压过高或者填料上出现明显污染，需要进行在位清洗操作。
4.1 去除强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类
方法一: 使用30%异丙醇清洗5~10CV，接触时间为15~20min可以去除此类污染物，再用10CV的纯水清洗；
方法二: 使用0.3M或0.5M NaOH溶液冲洗填料3CV，然后用10~15CV的纯水清洗。
4.2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl溶液清洗10~15min，再用10CV纯水清洗，清洗好的柱子用2CV的20%乙醇冲洗，置于2~8°C保存
图 1Ni-TED beads 6FF 纯化青霉素酶发酵液电泳图
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