产品货号：N30230

储存条件：2-8℃(20%⼄醇)

产品简介

LABLEAD的Ni亲和层析介质属于⼀类⾦属螯合介质，以⾼流速琼脂糖为基质，以次氮基三⼄酸（NTA）或亚氨基⼆⼄酸（IDA）为配基，并螯合⾦属离⼦Ni²⁺⽽形成的⼀种亲和层析介质。该亲和介质不仅具有吸附容量⼤、选择性好、分辨率⾼、超低限度的Ni²⁺泄露、易于再⽣、成本低等优点，还有利于保持产品的⽣物活性和提⾼产品的收率，从⽽⼴泛⽤于⽣物制药和⽣物⼯程下游蛋⽩质、核酸及多肽的分离纯化，尤其是组氨酸标记蛋⽩质的⾼效制备。

 产品特点

使用耐压基质,可以耐受最高0.3M Pa的压力，更稳定，因此该产品更适合用于工业大规模蛋白的纯化，可以在相对较高的流速下实现对目的蛋白的纯化。

 相关数据

 操作说明

Ni-IDA Chromrose 6FF可以在实验室被填装到中压层析柱中，以扩大产量。将填料填装到层析柱中，根据样本量和填料载量选择合适的层析柱和柱高。

1. 缓冲液准备

所用缓冲液需要采用高纯水配制，使用前建议用0.45um滤膜过滤。 

平衡缓冲液：500mM NaCl，20mM Tris-Hcl，PH=7.4

漂洗缓冲液：500mM NaCl，20mM Tris-Hcl，10mM咪唑，PH=7.4

洗脱缓冲液：500mM NaCl，20mM Tris-Hcl，500mM咪唑，PH=7.4

 2样品准备

为了避免堵塞层析柱，样品应经离⼼或微滤处理.进料量根据介质的载量和料液中⽬标蛋⽩的含量计算。

 3样品纯化

（1）平衡：

⽤5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱，⾄流出液电导和pH不变（与平衡液⼀致）。对于结合⼒较强的带组氨酸标记的蛋⽩质，平衡缓冲液中可加⼊低浓度（20~40mM）的咪唑。

（2）进样：样品缓冲液应尽可能与平衡液⼀致。固体样品可⽤平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可⽤平衡液透析，⾼浓度样品溶液可⽤平衡液稀释。

（3）淋洗：上样完毕后继续⽤平衡缓冲液淋洗⾄基线。

（4）洗脱：洗脱⼀般有两种⽅式，⼀是采⽤竞争试剂，例如咪唑（0~0.5M）、组氨酸（0~0.05M）、氯化铵（0~2M）等将蛋⽩质从柱⼦上置换下来；⼆是减⼩pH值，洗脱⽬标蛋⽩，⼤多数蛋⽩质在pH4~6的范围内可被洗下来。⽤竞争试剂咪唑或减小pH值的⽅法洗脱蛋⽩质，⾦属离子仍结合在柱⼦上；若⽤竞争试剂组氨酸或氯化铵洗脱蛋⽩质，会将⾦属离⼦和蛋⽩质的复合物⼀起洗下来。

注：为了减少杂蛋⽩在层析柱上的吸附，可在确保⽬标蛋⽩吸附的情况下适当增加样品缓冲液中的咪唑。对于包涵体蛋⽩，相应的可在平衡、上样和洗脱的缓冲液中加⼊8M Urea或6M Gua-HCl。洗脱缓冲液中必须加⼊0.15~1.0M NaCI，以消除离⼦交换作⽤。梯度洗脱最好在起始平衡液的恒定pH下进⾏，可采⽤线性梯度或阶越式梯度洗脱。

（5）再生：介质使⽤数次（具体与样品特性、样品体积、⾦属离⼦等有关）后，或者螯合其他⾦属离⼦前，需要进⾏再⽣处理。⾸先⽤2~3 CV的0.1M EDTA和0.5M NaCl pH7.0清洗柱⼦，并⽤2~3CV以上的0.5M NaCl溶液清洗，除去主柱上残留的EDTA，然后再螫合相应的⾦属离⼦。若有变性蛋白质或脂类物质在再生过程中未能有效去除,可用原位清洗(CIP)的方法除去。

4原位清洗

为了避免不同样品间的相互⼲扰，或者当介质污染⽐较严重时（反压增加），需要对介质进⾏在位清洗。在位清洗前，需要预先除去介质上螯合的⾦属离⼦（⻅再⽣操作）。在位清洗时，可采⽤反向冲洗的⽅法。

（1）对于以离⼦键结合的蛋⽩，可⽤2~3CV以上的2M NaCl清洗，并⽤3CV以上的纯⽔冲洗。

（2）对沉淀蛋⽩、以疏⽔性结合的蛋⽩或脂蛋⽩，可⽤1M NaOH清洗（1~2h），并⽤3~10CV平衡液和3CV以上的纯⽔冲洗。

（3）对疏⽔性结合的蛋⽩、脂蛋⽩和脂类物质，可⽤5~10CV的70%⼄醇或30%异丙醇清洗（20min以上），并⽤3~10CV的纯⽔冲洗。

此外，也可⽤2CV含去污剂的碱性或酸性溶液清洗。如⽤0.1~0.5%的⾮离⼦去污剂+0.1M⼄酸冲洗1~2h，并⽤5~10CV的纯⽔冲洗。