产品货号:N3021P
储存温度:2-8℃,有效期5年
产品简介
LABLEAD⽣物⽣产的Ni亲和层析介质属于⼀类⾦属螯合介质,以⾼流速琼脂糖为基质,以次氮基三⼄酸(NTA)或亚氨基⼆⼄酸 2+(IDA)为配基,并螯合⾦属离⼦Ni ⽽形成的⼀种亲和层析介质。
该亲和介质不仅具有吸附容量⼤、选择性好、分辨率⾼、超低限度的Ni 2+ 泄露、易于再⽣、成本低等优点,还有利于保持产品的⽣物活性和提⾼产品的收率,从⽽⼴泛⽤于⽣物制药和⽣物⼯程下游蛋⽩质、核酸及多肽的分离纯化,尤其是组氨酸标记蛋⽩质的⾼效制备。
名称 | Ni-NTA 6FF |
配基 | 次氮基三乙酸[NTA] |
基质 | 6%高度交联琼脂糖 |
整合量 | ~25umol/mL |
动志吸附载量 | >40mg组氨酸 标签蛋自/mL介质 |
平均粒径 | 90um,分布45-165um |
推荐流速 | 150~15000px/h (根据柱子规格选择备透滇速) |
最大耐压 | 0.3MPa |
pH稳定性 | 3-12(工作) 2-14(清洗) |
化学稳定性 | 40℃放置一周:0.01MHCI,0.1M NaOH; 12h:1M Na0H,70%乙酸; 1h:2% SDS 30min:30%异丙醇 |
储存 | 2-8℃(20%己醇) |
应用 | 用于生物制药和生物工程下游蛋白质、及多肚的分离纯化,尤其是组氨酿标记蛋白质的高效制备 |
操作说明
Ni-NTA 6FF系列产品可以在实验室被填装到LABLEAD中压层析柱中,以扩⼤产量。将填料填装到层析柱中,根据样本量和填料载量选择合适的层析柱和柱⾼。
1.1缓冲液准备
所⽤缓冲液需采⽤⾼纯⽔配制,使⽤前建议⽤0.45μm滤膜过滤。
平衡缓冲液:
20mMTris-HCl,500mMNaCl,pH=7.4
洗涤缓冲液:
20mMTris-HCl,500mMNaCl,10mM咪唑,pH=7.4
洗脱缓冲液:
20mMTris-HCl,500mMNaCl,500mM咪唑,pH=7.4
1.2 样品准备
为了避免堵塞层析柱,样品应经离⼼或微滤处理. 进料量根据介质的载量和料液中⽬标蛋⽩的含量计算。
1.3 样品纯化
1) 平衡:
⽤5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱,⾄流出液电导和pH不变(与平衡液⼀致)。对于结合⼒较强的带组氨酸标记的蛋⽩质,平衡缓冲液中可加⼊低浓度(20~40 mM)的咪唑。
2) 进样:
样品缓冲液应尽可能与平衡液⼀致。固体样品可⽤平衡液溶解配制;
低浓度样品溶液可⽤平衡液透析,⾼浓度样品溶液可⽤平衡液稀释。
3) 淋洗:
上样完毕后继续⽤平衡缓冲液淋洗⾄基线。
4) 洗脱:
洗脱⼀般有两种⽅式,⼀是采⽤竞争试剂,例如咪唑(0~0.5M)、组氨酸(0~0.05M)、氯化铵(0~2M)等将蛋⽩质从柱⼦上置换下来;⼆是减⼩pH值,洗脱⽬标蛋⽩,⼤多数蛋⽩质在pH4~6的范围内可被洗下来。⽤竞争试剂咪唑或减⼩pH值的⽅法洗脱蛋⽩质,⾦属离⼦仍结合在柱⼦上;若⽤竞争试剂组氨酸或氯化铵洗脱蛋⽩质,会将⾦属离⼦和蛋⽩质的复合物⼀起洗下来。
注: 为了减少杂蛋⽩在层析柱上的吸附,可在确保⽬标蛋⽩吸附的情况下适当增加样品缓冲液中的咪唑。对于包涵体蛋⽩,相应的可在平衡、上样和洗脱的缓冲液中加⼊8MUrea或6MGua-HCl。洗脱缓冲液中必须加⼊0.15~1.0M-NaCI,以消除离⼦交换作⽤。梯度洗脱最好在起始平衡液的恒定pH下进⾏,可采⽤线性梯度或阶越式梯度洗脱。
5) 再⽣:
介质使⽤数次(具体与样品特性、样品体积、⾦属离⼦等有关)后,或者螯合其他⾦属离⼦前,需要进⾏再⽣处理。⾸先⽤2~3CV的0.1MEDTA+0.5M NaClpH7.0清洗柱⼦,并⽤2~3CV以上的0.5MNaCl溶液清洗,除去主柱上残留的EDTA,然后再螫合相应的⾦属离⼦。
2. 原位清洗
为了避免不同样品间的相互⼲扰,或者当介质污染⽐较严重时(反压增加),需要对介质进⾏在位清洗。在位清洗前,需要预先除去介质上螯合的⾦属离⼦(⻅再⽣操作)。在位清洗时,可采⽤反向冲洗的⽅法。
1) 对于以离⼦键结合的蛋⽩,可⽤2~3CV以上的2MNaCl清洗,并⽤3 CV以上的纯⽔冲洗。
2) 对沉淀 蛋 ⽩ 、以 疏 ⽔ 性 结 合 的 蛋 ⽩ 或 脂 蛋 ⽩,可⽤1MNaOH清洗(1~2h),并⽤3~10 CV平衡液和3 CV以上的纯⽔冲洗。
3)对疏⽔性结合的蛋⽩、脂蛋⽩和脂类物质,可⽤5~10CV的70%⼄醇或30%异丙醇清洗(20min以上),并⽤3~10CV的纯⽔冲洗。
此外,也可⽤2 C V含去污剂的碱性或酸性溶液清洗 。如⽤0.1~0.5%的⾮离⼦去污剂+0.1M⼄酸冲洗1~2h,并⽤5~10CV的纯⽔冲洗。
注意:如果使⽤Xtrap预装柱,可省略装柱步骤。