货 号:T2133-0.5ml
储存条件:-20°C避光保存,有效期一年,使用前请轻轻混匀。
试剂盒组分
货 号 | LabFect SP Prime | 溶液 A |
T2133-0.5ml | 0.5ml | 0.40ml |
产品介绍
LabFect SP Prime Transfection Reagent 是我公司研发团队在Labfect Prime Transfection Reagent 的基础上进一步研发成功的专门用于悬浮细胞核酸高 效转染的试剂盒。LabFect SP Prime 具有非常卓越的转染性能,可高效转染绝大多数悬浮细胞,在部分悬浮细胞中,转染效率可高达 85%以上(EGFP 质粒) 。LabFect SP Prime Transfection Reagent功能强大,不仅可高效转染较大分子的质粒 DNA ,还可高效转染 mRNA 、siRNA 、mimics 和各种小分子DNA 。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同,LabFect SP Prime采用生物可降解材料配制,对细胞的毒性很低,转染后 24 小时细胞 几乎无明显死亡。LabFect SP Prime 使用也非常方便,先将转染试剂与质粒 DNA 混合,再将转染试剂-DNA 复合物直接加入培养细胞中,血清不影响其转染效果,不必刻意添加或更换培养液,操作十分简便。
产品特点
1. 卓越的细胞转染性能:可高效转染多种悬浮细胞,转染效率可高达85% 以上;
2. 转染功能强大,不仅可高效转染大分子质粒DNA,还可高效转染mRNA、 siRNA 、mimics和各种小分子DNA;
3. 极低的细胞毒性:使用可降解生物材料,细胞毒性低,转染细胞死亡率不到10% ,大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响;
4. 操作简便,可用于含血清培养基培养细胞的转染,转染前后不需要更换培养液。
操作步骤:
一、质粒DNA转染 (以24孔板转染为例) :
A. 细胞接种:
1. 转染前一天或者两天接种细胞,接种细胞量为4-7×105个;
2. 确保转染时细胞比活度为90%以上,且生长状态良好;
3. 如果细胞在转染前一天铺板,转染时可以不用换液,如果细胞在转染前两天铺板,转染时最好换液。
B. LabFect SP Prime/DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):
1. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,再加入适量的转染试剂,见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并加入适量的溶液A ,轻轻混匀,再加入适量的DNA ,见附表。用移液器再次轻轻混匀 后在室温静置5分钟。
3. 将DNA-培养基混合物滴加至LabFect SP Prime-培养基混合物中,用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后,立即转染。注意:LabFect SP Prime-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要,切勿颠倒。
注意:离心管最好使用聚丙烯离心管。
C.转染:
1. 将拟转染细胞强烈振荡20-40秒,确保培养细胞分散成单细胞悬液,无细胞结团。
2. 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中,边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后,立即将培养板转入培养箱继续培养。
3. 培养24~96小时后观察或收获。
4. LabFect SP Prime在完全培养基中仍有较高的转染效率,因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。因收获蛋白需要,可以使用悬浮 细胞培养专用的无血清培养基。
二、siRNA转染 (以24孔板转染为例) :
A. 细胞接种:
1. 转染前一天对细胞进行转接,使转染时细胞密度为30-50%左右,且生长良好、无支原体污染 (非常重要);
2. 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基, 以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
B. LabFect SP Prime /siRNA转染复合物制备 (该步完成后应立即转染):
1. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并添加适量的转染试剂(见下表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并添加适量的siRNA (见下表) ,用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3. 将siRNA-培养基混合物滴加至LabFect SP Prime-培养基混合物中,用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后,立即转染。
C. 转染:
1. 将拟转染细胞强烈振荡20-40秒,确保培养细胞分散成单细胞悬液,无细胞结团。
2. 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中,边加边轻轻晃动培养板。加完后,立即将培养板转入培养箱继续培养。
3. 37°C培养24-72h ,检测基因抑制效果。如果需要,细胞培养4-6h时可以更换培养基,但不是必须。
4. LabFect SP Prime在完全培养基中仍有较高的转染效率,因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。
注意事项:
1. 首次转染,请务必进行优化实验,如24孔板质粒转染,每孔质粒用量0.8ug ,LabFect SP Prime可选择2.0ul 、2.5ul 、3.0ul 、3.5ul进行优化。24 孔板siRNA转染,LabFect SP Prime用量2ul ,siRNA用量可选10pmol 、20pmol 、30pmol 、40pmol进行优化。
2. 在制备DNA或siRNA转染复合物时,应避免制备体系中存在血清,因血清会干扰LabFect SP Prime与DNA或siRNA形成复合物。培养体系中尽 量不要添加抗生素,抗生素会导致培养细胞死亡。
3. 溶液A仅用于质粒转染,RNA或siRNA转染不需加入溶液A。
4. 请注意质粒转染和siRNA转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异,不要混用同一条件。
5. 悬浮细胞转染难度大,且受细胞种类、细胞密度、细胞生长情况、培养方法、操作手法等因素的影响,研究者在转染之前,应查阅相关文 献,认真准备转染方案,并对转染效果有比较理性的判断。
6. 本产品适合于质粒DNA 、siRNA分别独立转染。
7. 本产品仅用于科学研究,不得用于医学临床用途。
附表 1 :质粒转染不同培养体系推荐初始转染条件
培养皿 | 96 孔板 | 48 孔板 | 24 孔板 | 12 孔板 | 6 孔板 | 10cm 皿 | |
培养基、 试剂、 DNA量 | 无血清培养基(μl) | 2x10 | 2x25 | 2x50 | 2x100 | 2x200 | 2x1000 |
溶液 A(μl) | 0 4 | 1.0 | 2 0 | 4.0 | 8 | 40 | |
LabFect SP Prime (μl) | 0.5 | 1.3 | 2.5 | 5.0 | 10 | 50 | |
1μg/ μl plasmid (μl) | 0. 16 | 0.4 | 0.8 | 1.6 | 3.2 | 16 | |
完全培养基(ml) | 0. 10 | 0.25 | 0.50 | 1.0 | 2.0 | 10 |
附表 2 :siRNA 转染不同培养体系推荐初始转染条件
培养皿 | 96 孔板 | 48 孔板 | 24 孔板 | 12 孔板 | 6 孔板 | 250px 皿 | |
培养基、 试剂、 DNA 量 | 无血清培养基(μl) | 2x10 | 2x25 | 2x50 | 2x100 | 2x200 | 2x1000 |
LabFect SP Prime(μl) | 0.4 | 10 | 20 | 40 | 80 | 40 | |
siRNA (pmol) | 4 | 10 | 20 | 40 | 80 | 400 | |
完全培养基(ml) | 0. 10 | 0.25 | 0.50 | 1.0 | 2.0 | 10 |
适用细胞系:293F,THP- 1、RAW264、BMDM、CHO-S、Jurkat,K562、U937,NB4、MSCs等。