货号：P0202

存储条件：－20℃ 保存。浓度：5U/µl

产品组成：

产品说明：

Pfu DNA Polymerase是从克隆有Pyrococcus furiosis DNA Polymerase基因的大肠杆菌中分离纯化的，Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA 聚合酶活性和 3′-5′外切酶活性，能纠正DNA 扩增过程中产生的碱基错配。Pfu酶是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率最低的。其PCR产物为平端，可直接用平端载体克隆

活性单位：

1单位（U）Pfu DNA Polymerase 活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板引物，将 10nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

质量控制：

SDS-PAGE 检测纯度大于99%，经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。

酶贮存缓冲液：

50mM Tris-HCl(pH 8.2)，0.1mM EDTA，1mM DTT，Stabilizers，50% glycerol。

10×Pfu Buffer (含 Mg2+)：

200mM Tris-HCl (pH8.8)，100 mM KCl，100 mM(NH4)2SO4，20 mM MgSO4，其他成分。

适用范围：

用于DNA的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析（SNP）和平末端补平等。

注意事项：

(1) Pfu酶具有 3′-5′的外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度比Taq酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，建议 Pfu 酶的延伸速度为每分钟 1 kb 如扩增片段小于4 kb；延伸速度为每分钟 0.5 kb 如扩增片段大于 4 kb。同时 Pfu 酶的 3′-5′的外切酶活性可能降解引物， 所以应先加 dNTP 后，再加 Pfu 酶到反应体系中，并立即进行 PCR 反应。

(2)用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，Tm在55－80℃之间，引物浓度在0.1-0.5 μM之间，比Taq酶略高。

(3) Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。

(4) 高保真PFU对于dNTP纯度要求很高，因此建议用本酶配套的超纯dNTP mix。

建议的PCR条件：(以50μl反应体系为例)

Template                        <0.5 μg

Forward Primer(10 μM)            1 μl

Reverse Primer(10 μM)            1 μl

10×Buffer(With MgSO4)            5 μl

SuperPure dNTP Mixture(各 10mM)   1 μl

Pfu DNA polymerase(5U/μl)         0.5μl

dH2O                            up to 50 μl

PCR 反应循环的设置：(以质粒为模板扩增，一般 1kb/min 就足够了。)

94°C:       2-5 min

94°C:        30 sec

50-60°C:     30 sec

72°C:        2 min/1 kb

72°C:        5-10 min

30cycles