货号：D5026

储存条件：-20 ℃保存。

产品组分：

产品说明：

本产品是重组表达来源的 DNasel(Deoxyribonucleasel)，中文名称为脱氧核糖核酸酶I，是一种可消化单链或双链DNA 的脱氧核糖核酸内切酶，它识别并切割磷酸二酯键，产生5'端为磷酸基团，3端为羟基的单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸。

DNasel的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子Mg2+、Mn2+等激活。在 Mg2+存在的情况下，该酶可随机识别并切割双链 DNA任意一条链上的任意位点；而在Mn2+存在的情况下，可识别并切割DNA 两条链上几乎相同的位点，产生平末端或有1~2个核苷酸突出的粘末端 DNA 片段。

活性定义

1 活性单位(U) 是指在 37℃℃ 10 min 能够完全降解 1μg pUC19 质粒 DNA 所需要的酶量。

适用范围

1. 去除 RNA 样品中的基因组 DNA 污染。

2. 体外转录：使用 RNA 聚合酶进行体外转录后，用于模板 DNA的去除。

3. 用于 DNasel足迹法(DNase I footprinting)分析 DNA-蛋白质相互作用。

4. 与 DNA Polymerase I配合使用，用于缺口平移法标记 DNA。

5. 用于 DNA 随机片段文库构建。

6. 细胞凋亡 TUNEL 检测中部分剪切基因组 DNA 作为阳性对照。

质量控制

蛋白质纯度

使用 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。

RNase 残留检测

将1U DNasel，RNase-fre与500ng总 RNA 在37°C温育1h，用琼脂糖凝胶电泳检测超过90%的RNA仍保持完整。

 使用方法

1.去除 RNA 样品中的基因组 DNA 污染

加样体系：

反应条件：37°C 15 min。

失活条件：

① 使用加入终浓度5 mM EDTA 溶液混匀后 75℃ 10min 进行热失活，EDTA 可避免 RNA 在加热过程中与反应体系中的二价阳离子发生水解。若进行此步热失活处理，下游 RT-PCR 或 RT-qPCR 反应体系中需要额外补加终浓度 2.5 mM Mg2+，可避免反应体系中过量的 EDTA 影响下游RT-PCR 或 RT-qPCR 反应。

② 使用柱纯化法或者苯酚/氯仿抽提失活 DNase l。

2.体外转录后模板 DNA 的去除

操作步骤如下：

① 每 0.5 μg 模板 DNA 的转录反应体系中加入1U DNase l，酶的用量可以根据实际需要优化。

② 反应条件：37°℃ 15 min。

③ 失活条件：柱纯化法或者苯酚/氯仿抽提。

注意事项

1. 进行 RNA 样品操作时请在 RNase-free 管中进行加样。

2. 在使用本品进行RNA样品中DNA的去除实验时，可在反应体系中添加终浓度1U/μl RNase Inhibitor以保护RNA不被降解。

3. DNasel对物理变性敏感，混匀时请勿剧烈振荡。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行实验操作。