货号：N6141P

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产品简介

NHS Activated Chremrose是种将高度交联的琼脂糖微球用NHS活化形成的生物亲和层析分离介质。该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构，同生物活性大分子有很好的相容性，具有载量高非特异性吸附少、流速快，使用便捷偶联条件温和、偶联效率高等特点。本活化的琼脂糖凝胶能温和地同氨基基团反应，特别适合偶联抗体、链霉亲和素、酶和核酸等功能性生物大分子。

技术指标

偶连方法

以4 mL NHSActived Chremrose 4FF偶联BSA为例：

1. 溶液配置

清洗液：1mMHCl，100 mL，4°C预冷；

偶联缓冲液：0.2M NaHCO₃+0.5M NaCl，pH8.3，50ml

2. 蛋白偶联

1)  准确称取40mg BSA溶于 4.0 mL偶联缓冲液中，溶解完全后备用。

2） 将约4mL NHS Actived Chremrose 4FF用4C预冷的清洗液洗3-5次后抽干，再用偶联缓冲液清洗2次，抽干后将4mL NHS活化胶（约3.0g）加入到10mL的反应器（磨口三角瓶或离心管）中（注意：清洗后应立即使用）。

3）将BSA溶液加入到活化胶中，反应温度恒定在4'C（或室温/25°C），摇床中振荡混合（离心管水平放置），转速120rpm，反应过夜（或5h）。

4） 反应停止后，静置，取上清离心（3000g，5min，室温），收集上清液用于未偶联BSA的浓度分析（可采用Bradford、Lowry、BCA法，NHS在280nm有强吸收，不能采用OD280测定蛋白浓度），计算偶联的BSA的配基密度；将其余料液转移到砂芯漏斗中用去离子水清洗、抽干。

5） 封闭未反应的NHS：将4mL抽干的BSA亲和胶加入到25mL磨口三角瓶中，加入9 mL 0.5 mol/L 乙醇胺+0.5 M NaCl，pH 8.3溶液（或0.1mol/LTris-HCl，pH8.3）。反应温度恒定在4°（或室温/25°C），搅拌速度120 rpm，反应过夜（或5 h）。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干，用去离子水清洗。

6) 清洗：将制得的BSA琼脂糖凝胶依次用5倍的去离子水、0.1M含0.5M NaC! 的乙酸一乙酸钠缓冲液（pH4.0）、去离子水、0.1M含0.5M NaCl的硼酸一四硼酸钠缓冲液（pH8.0）和去离子水充分洗涤（重复交替清洗3次），抽干，去除未反应的配基。

7) 保存：制得的BSA亲和介质保存于4°C、20%乙醇溶液中。备注：其他配基的偶联方法与BSA类似，但反应条件（pH、温度、时间、配基加入量）需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。

注意事项：偶联缓冲液可用碳酸盐和磷酸盐等缓冲液，但绝对不能使用含有氨基的Tris等缓冲液。