货号：ATP100
产品说明
三磷酸腺苷(ATP)是细胞代谢的化学能量，常被称为细胞的“能源货币”。ATP只在活细胞进行光合作用和呼吸作用时产生，在细胞生命活动包括生物合成反应、细胞运动和细胞分裂过程中消耗。它是细胞活动的重要指标，并且在研究和药物研发中已被用作一种细胞活性和细胞毒性的检测方法。 本公司生产的ATP检测试剂盒为测量细胞内的ATP提供了一种快速的方法。用专门的工作试剂将细胞溶解，释放出ATP，ATP在荧光素酶的作用下，立即与底物D-荧光素反应产生光。光的强度可直接用来测量细胞内ATP浓度。这种非放射性、均相的细胞检测在微孔板中进行,该试剂适用于所有培养基和高通量药物筛选中应用的96孔板、384孔板和液体加样设备。
产品特点
安全：无放射性检测 。
灵敏、准确：最低检测 0.1 mM ATP 或 40个细胞。
均相、方便： “混合-检测型”的均相检测方式。不涉及清洗和试剂转移的步骤。
高通量: 在96孔板和384孔板中常观察到Z’ 因子 > 0.5。
产品用途
细胞和其他生物样品中ATP的测定 。
试剂盒规格
缓冲液: | 10 mL |
底物试剂： | 120 mL |
ATP酶: | 120 mL |
标准品： | 100 mL 3 mM ATP |
储运条件：冰运，-20°C 保存。
预防措施：本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。
测试步骤
1. 标准曲线。配备1000 mL 30 mM ATP 标准：将10 mL 3 mM 标准和 990 mL 蒸馏水(若用于细胞测定，则用细胞培养液稀释ATP标准)混匀。按照下表比例，用蒸馏水（培养液）稀释样品。取白色不透明96孔板，将100 mL 标准放入不同孔中。
No | 30mM标准+ H2O/培养液 | Vol (mL) | ATP (mM) |
1 | 150 mL + 0 mL | 150 | 30 |
2 | 120 mL + 30 mL | 150 | 24 |
3 | 90 mL + 60 mL | 150 | 18 |
4 | 60 mL + 90 mL | 150 | 12 |
5 | 45 mL + 105 mL | 150 | 9 |
6 | 30 mL + 120 mL | 150 | 6 |
7 | 15 mL + 135 mL | 150 | 3 |
8 | 0 mL + 150 mL | 150 | 0 |
样品：将100 mL样品放入不同孔中。
组织样品：将 20 mg 样品加入到200 μL冷磷酸缓冲液PBS中均浆，将捣碎的样品以12,000g速度离心5分钟。取 1-100 μL 上清液加入每个孔中，加入PBS使样品总体积达到100 μL。测试几组样品并选择标准曲线范围内的值用来计算ATP浓度。
细胞培养：将细胞放入白色不透明组织培养孔板(100 mL/96孔板, 25 mL/384孔板)。如果需要，将 5 mL PBS或培养基中溶解的测试化合物和对照物加入每个孔中。轻轻晃动孔板使其混合，培养一段时间（如一整夜）。
2. 测试：将所有试剂放至室温。测试过程中，将解冻的ATP 酶放在冰上或4°C下保存。
96孔板： 按比例将95 mL 缓冲液、1 mL 底物 和 1 mL ATP酶混匀，配成工作试剂。在每个孔中加入 90 mL 工作试剂。
384孔板：将 30 mL缓冲液、0.3 mL 底物和 0.3 mL ATP酶混匀，配成工作试剂。在每个孔中加入25 mL试剂。
轻敲孔板使其混合，室温下培养10分钟。
3. 在光度计上读取发光值。对于大多数光度计测量时间 0.1 到5 秒较为合适。
总则
信号稳定性：在加入再生试剂后，发光信号会稳定约20分钟，随后缓慢下降
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