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  • Taq-HS Probe qPCR Premix(探针法荧光定量试剂)(货号:P0211)
  • Taq-HS Probe qPCR Premix(探针法荧光定量试剂)(货号:P0211)

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CAS:
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产品货号P0211

存储条件:长期储存请于 -20℃避光保存,Mix 融解后可在 4℃避光条件下稳定存放一个月,尽量避免反复冻融。

产品组分

组分

规格

Taq-HS Probe qPCR Premix (Universal)

5×1 ml


产品说明

Taq-HS Probe qPCR Premix是基于独特的双组份热启动Taq聚合酶开发的实时定量PCR用2×预混液。本产品已包含除引物和样品 DNA 以外的所有荧光定量 PCR 组分,可减少操作步骤,缩短加样时间,降低了污染几率,适用于以 cDNA 或 DNA 为样品的 TaqMan 探针法检测。

本产品含有独特校正染料,与一系列qPCR设备兼容,包括需要ROX 校正的仪器,实验操作过程中不需要额外添加染料来校正仪器。

使用方法

1.使用注意

① 因Mix 中预混有染料,其保存或反应体系配制过程应避免强光照射;

② 使用前上下颠倒轻轻混匀 Mix,请勿涡旋振荡混匀,避免产生过多气泡 ;

③ Mix中含有Universal 校正染料,适用于所有机型,无需额外添加染料。

2. 建议的反应体系

试剂

使用量

终浓度

Taq-HS Probe qPCR Premix

10 μl

正向引物 (10μM)a

0.4 μl

0.2 μM

反向引物(10μM)a

0.4 μl

0.2 μM

TaqMan探针(5 μM)b

μl

0.2μM

DNA模板c

μl

10~200 ng/20ul

Nuclease-Free Water

To  20 μl


a.引物推荐终浓度为 0.2 μM,效果不佳时可以在0.1~1μM进行调整;引物长度请设定在80-25bp,GC含量为40-60%。最佳效率的扩增目标片段一般为80-200bp,设计时应尽量避免发夹结构、二聚体等复杂结构,并尽可能横跨内含子区域。

b.探针终浓度推荐为 0.25 μM,效果不佳时可以在 0.1~1 μM 进行调整 ;

c.模板添加量不应超过总反应体系的10%,推荐加样量为 1~2 μl。不同种类DNA模板中含有的靶基因拷贝数目不同,必要时可进行梯度稀释,以确定最佳的DNA模板添加量。

3.qPCR反应程序(可根据机型适当调整)

两步法

步骤

温度

时间

预变性

95℃

5 min

变性

95℃

10 sec

退火 & 延伸

60℃

30 sec


注意事项

1.使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。

2.避免反复冻融Mix,开启后尽量在3个月内使用完毕。


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