产品货号:P0211
存储条件:长期储存请于 -20℃避光保存,Mix 融解后可在 4℃避光条件下稳定存放一个月,尽量避免反复冻融。
产品组分
组分 | 规格 |
Taq-HS Probe qPCR Premix (Universal) | 5×1 ml |
产品说明
Taq-HS Probe qPCR Premix是基于独特的双组份热启动Taq聚合酶开发的实时定量PCR用2×预混液。本产品已包含除引物和样品 DNA 以外的所有荧光定量 PCR 组分,可减少操作步骤,缩短加样时间,降低了污染几率,适用于以 cDNA 或 DNA 为样品的 TaqMan 探针法检测。
本产品含有独特校正染料,与一系列qPCR设备兼容,包括需要ROX 校正的仪器,实验操作过程中不需要额外添加染料来校正仪器。
使用方法
1.使用注意
① 因Mix 中预混有染料,其保存或反应体系配制过程应避免强光照射;
② 使用前上下颠倒轻轻混匀 Mix,请勿涡旋振荡混匀,避免产生过多气泡 ;
③ Mix中含有Universal 校正染料,适用于所有机型,无需额外添加染料。
2. 建议的反应体系
试剂 | 使用量 | 终浓度 |
Taq-HS Probe qPCR Premix | 10 μl | 1× |
正向引物 (10μM)a | 0.4 μl | 0.2 μM |
反向引物(10μM)a | 0.4 μl | 0.2 μM |
TaqMan探针(5 μM)b | 1 μl | 0.25 μM |
DNA模板c | X μl | 10~200 ng/20ul |
Nuclease-Free Water | To 20 μl |
a.引物推荐终浓度为 0.2 μM,效果不佳时可以在0.1~1μM进行调整;引物长度请设定在80-25bp,GC含量为40-60%。最佳效率的扩增目标片段一般为80-200bp,设计时应尽量避免发夹结构、二聚体等复杂结构,并尽可能横跨内含子区域。
b.探针终浓度推荐为 0.25 μM,效果不佳时可以在 0.1~1 μM 进行调整 ;
c.模板添加量不应超过总反应体系的10%,推荐加样量为 1~2 μl。不同种类DNA模板中含有的靶基因拷贝数目不同,必要时可进行梯度稀释,以确定最佳的DNA模板添加量。
3.qPCR反应程序(可根据机型适当调整)
两步法
步骤 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 min |
变性 | 95℃ | 10 sec |
退火 & 延伸 | 60℃ | 30 sec |
注意事项
1.使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。
2.避免反复冻融Mix,开启后尽量在3个月内使用完毕。