产品货号:R0202
储存条件:长期保存请于 -20℃避光保存,Mix 融解后可在 4℃避光条件下稳定存放一个月,尽量避免反复冻融。
产品简介
Taq SYBR® Green qPCR Premix 是 SYBR® Green I 嵌合染料法专用qPCR试剂,为2×预混液,包含除引物和DNA样品以外的所有qPCR组分,可减少操作步骤,缩短加样时间,降低污染几率。其核心组分是经抗体修饰的热启动Taq DNA聚合酶,配合精心优化的Buffer体系以及PCR反应促进因子,使产品具有特异性强、扩增效率高等特点,有效抑制非特异性扩增,可对宽广浓度范围的模板进行准确定量,获得稳定可靠的qPCR结果。
使用方法
1.适配机型
全机型通用
2.使用注意
① 因Mix中预混有染料,其保存或反应体系配制过程应避免强光照射;
② 使用前上下颠倒轻轻混匀Mix,请勿涡旋振荡混匀,避免产生过多气泡。
3.建议的qPCR反应体系
试剂 | 使用量 | 终浓度 |
Taq SYBR® Green qPCR Premix | 10ul | 1× |
正向引物 (10uM)a | 0.4ul | 0.2uM |
反向引物(10uM)a | 0.4ul | 0.2uM |
DNA模板b | X ul | 10~200 ng/20ul |
Nuclease-Free Water | To 20ul |
a.调通推荐的引物终浓度为0.2uM,反应效果不佳时可在0.1~1uM范围内进行调整;
b.推荐模板加样量的为1~2ul,如模板类型为未稀释cDNA原液,模板添加量不应超过总反应体系的10%,不同种类DNA模板中含有的靶基因拷贝数目不同,必要时可进行梯度稀释,以确定必要的DNA模板添加量。
4.qPCR 反应程序(可根据机型适当调整)
两步法:
三步法:
a.根据引物的Tm值进行退火&延伸(退火)温度的设定;若扩增片段在200bp以内,退火&延伸(延伸)时间可以设置为15sec;此外,退火&延伸(延伸)时间的设置还需根据您使用的qPCR仪所需的最短数据采集时间自行调整;
b.不同 qPCR 仪的熔解曲线采集程序有差别,一般可使用仪器默认的熔解曲线采集程序。
5.实验优化
若使用默认反应条件反应性能不佳时,则需要进行反应条件的优化,可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行:
① 引物浓度调整
当引物终浓度在0.1~1.0uM范围之间变化时,引物浓度越低,扩增特异性越高,但扩增效率会有所下降。
② 扩增程序优化
需提高扩增特异性,可使用两步法程序或提高退火温度;需提高扩增效率,可使用三步法程序或延长延伸时间。
6.引物设计原则
① 扩增产物长度建议控制在80~200bp;
② 引物长度为18~25bp;
③ 正向引物和反向引物的Tm值相差不超过 1℃为佳,Tm值控制在58~62℃为佳;
④ 引物的GC含量控制在 40%~60% 之间;
⑤ 引物A、G、C、T整体分布尽量要均匀,避开T/C或者A/G的连续结构(特别是3'端);
⑥ 引物3'端最后一个碱基最好为G或者C;
⑦ 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列;
⑧ 使用NCBI BLAST功能检索确认引物的特异性。
Identification and Characterization of Peptides from Bovine Collagen Hydrolysates that Promote Myogenic Cell Proliferation;JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY;IF:5.895;DOI:10.1021/acs.jafc.2c08929
Protective effects of Sulforaphene on kidney damage and gut dysbiosis in
Long‑term intake of sulforaphene alleviates d‑galactose‑induced skin