货号：MF0202
储存条件：-20℃保存，有效期 1 年，避免反复冻融
产品介绍
miRNA PolyA+ RT Kit 采用基因工程改造的 Poly A 聚合酶，可为 miRNA 高效添加 Poly A 尾，以便于后续的 RT 反应。逆转录引物为特别设计的含有 Oligo d(T)的引物，高度亲和含有 Poly A 尾的 miRNA，使 RT 反应能够高效进行。miRNA PolyA+ RT Kit (gDNA-)的 RT 效率优于多家同类产品，特别地，与LABLEAD生物 miRNA PolyA SYBR qPCR Kit 配套使用，可免费获得配套的 qPCR 下游引物和更加理想的实验结果。
产品特点
基因工程优化的Poly A聚合酶，miRNA Poly A聚合高效快速;特别设计的含Oligo d(T)的引物，能够与miRNA Poly A+高效结合，RT效率高于多家同类试剂;
同一RNA一次RT可获得多个miRNA的RT产物，后续可进行多个miRNA的检测，节省样本用量。
产品组分
组 分 | 20T |
RNase free ddH2O | 400μl |
Poly A(yellow) | 20μl |
2xPoly A Buffer | 200μl |
RTase Mix (red) | 40μl |
2x RT Buffer | 200μl |
使用方法：
1.RNA 加 A 尾：
取 RNase-free 离心管，配制如下混合液：
RNase free ddH2O | to 20μl |
Poly A | 1μl |
2xPoly A Buffer | 10μl |
RNA | 10pg~2ug |
轻轻混匀，37℃ 30min，迅速置于冰上。
2. RT 反应液配制：
上述反应液在使用前 5000rpm 离心 5s：
取上述反应液 | 8μl |
2x RT Buffer | 10μl |
RTase Mix | 2μl |
用移液器轻轻吹打混匀。
3. RT 反应：
25℃ | 5min |
50℃ | 15min |
85℃ | 5min |
反应完毕后，5000rpm 离心 5s，尽快放于冰上，直接进行 PCR 反应。如暂时不用，请放置于-20°C 以下温度，在半年内使用完毕，不要反复冻融。模板如具有复杂二级结构或高 GC 区域，可将反应温度提高至 55℃。
质量控制
以合成的 U6 为样本，使用本试剂盒，加 A、反转录，取1/10cDNA产物进行qPCR，CT值小于20。
注意事项：
1 用于 RT 反应的器具和水应进行 RNase 灭活处理，操作人员应佩戴口罩、手套等，以防 RNase 污染。
2 模板 RNA 使用量：总 RNA 可在 10pg~2ug 之间。
3 试剂配制过程建议在碎冰上进行，RTase Mix 粘度较大，应缓慢吸取，Tip 头不要插入液体太深，以免粘染太多酶液。
