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  • miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂盒(货号:MR0202)
  • miRNA加尾染料法荧光定量PCR试剂盒(货号:MR0202)

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    • 试剂规格:
    • 200T
CAS:
-


产品货号:MR0202

储存条件:-20℃保存,有效期 1 年,避免反复冻融

产品介绍

miRNA PolyA SYBR qPCR Kit 采用LABLEAD的化学修饰的热启动聚合酶,使用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行 miRNA 的荧光扩增, 具有高度的特异性,能够有效避免引物二聚体形成和其它形式的非特异扩增。反应缓冲液经充分优化,PCR 扩增效率高,荧光信号强,反应灵敏度优于多家同类产品。试剂盒免费配置优化后的 Tag Primer,使 miRNA 的扩增效果更有保障。

产品特点

使用化学修饰的热启动聚合酶,反应特异性高,可有效避免非特异扩增;

反应缓冲液经充分优化,PCR 扩增效率高,拥有更高的反应灵敏度;

免费提供优化的 Tag Primer,miRNA 的扩增效果更有保障。

 产品组分

 

200T

300T

400T

miRNA SYBR Mastermix

1.0ml × 2

1.0ml × 3

1.0ml × 4

Tag Primer

80ul

120ul

160ul

ddH2O

1.0ml × 2

1.0ml × 3

1.0ml × 4

U6-reward primer

80ul × 2

80ul × 3

80ul × 4


使用方法:

1、按下表配制反应体系 :

 RNase-free 离心管,配制如下混合液:

2× miRNA SYBR Mastermix

10ul

Tag Primer(10uM)

0.4ul

Specific primer(10uM)

0.4ul

Temlate DNA/cDNA

0.2ul

ddH2O

to 20ul

* 可自行设计合成 miRNA 正向引物。

 2、设置反应条件

激活 Taq

95℃ 5min

PCR 循环

95℃ 10S; 60℃ 30S; 40 循环

熔解曲线

95℃ 15S;60℃ 1min;95℃ 15S;1 循环

* 仪器类型不同,熔解曲线采集程序不同,使用仪器默认熔解曲线采集程序即可

说明:1、一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2μM 可得到较好的扩增效果。当反应结果不理想时,可以在 0.1-1.0μM 范围内调整引物浓度。

2、加样体积一般不超过 2.0ul,首次实验建议进行优化摸索,可分别取 2.0ul RT 原液及 2、4、8、16、32、64 倍稀释液进行 qPCR。

3、 PCR结果不甚理想,可考虑采用 3 段法温度设置进行扩增,扩增条件为:95℃ 5min;95℃ 10S;60℃ 20S;70℃ 20S(收集荧光信号)。

4、试剂保存与操作过程中避免强光照射。

5、配制反应体系时,避免过于震荡,以防气泡产生。

 质量控制

以合成的 U6 为样本,使用本试剂盒,加 A、反转录,取1/10cDNA产物进行qPCR,CT值小于20。

 

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