产品货号：MR0202
储存条件：-20℃保存，有效期 1 年，避免反复冻融
产品介绍
miRNA PolyA SYBR qPCR Kit 采用LABLEAD的化学修饰的热启动聚合酶，使用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行 miRNA 的荧光扩增， 具有高度的特异性，能够有效避免引物二聚体形成和其它形式的非特异扩增。反应缓冲液经充分优化，PCR 扩增效率高，荧光信号强，反应灵敏度优于多家同类产品。试剂盒免费配置优化后的 Tag Primer，使 miRNA 的扩增效果更有保障。
产品特点
使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，可有效避免非特异扩增；
反应缓冲液经充分优化，PCR 扩增效率高，拥有更高的反应灵敏度；
免费提供优化的 Tag Primer，miRNA 的扩增效果更有保障。
产品组分
组 分 | 200T |
miRNA PolyA SYBR Mastermix | 1.0ml × 2 |
Tag Primer | 80ul |
ddH2O | 1.0ml × 2 |
U6-reward primer | 80ul × 2 |
使用方法：
1、按下表配制反应体系 ：
取 RNase-free 离心管，配制如下混合液：
2× miRNA PolyA SYBR Mastermix | 10ul |
Tag Primer（10uM） | 0.4ul |
Specific primer（10uM） | 0.4ul |
Temlate DNA/cDNA | 0.2ul |
ddH2O | to 20ul |
* 可自行设计合成 miRNA 正向引物。
2、设置反应条件
激活 Taq | 95℃ 5min |
PCR 循环 | 95℃ 10S； 60℃ 30S； 40 循环 |
熔解曲线 | 95℃ 15S；60℃ 1min；95℃ 15S；1 循环 |
* 仪器类型不同，熔解曲线采集程序不同，使用仪器默认熔解曲线采集程序即可
说明：1、一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2μM 可得到较好的扩增效果。当反应结果不理想时，可以在 0.1-1.0μM 范围内调整引物浓度。
2、加样体积一般不超过 2.0ul，首次实验建议进行优化摸索，可分别取 2.0ul RT 原液及 2、4、8、16、32、64 倍稀释液进行 qPCR。
3、如 PCR结果不甚理想，可考虑采用 3 段法温度设置进行扩增，扩增条件为：95℃ 5min；95℃ 10S；60℃ 20S；70℃ 20S（收集荧光信号）。
4、试剂保存与操作过程中避免强光照射。
5、配制反应体系时，避免过于震荡，以防气泡产生。
质量控制
以合成的 U6 为样本，使用本试剂盒，加 A、反转录，取1/10cDNA产物进行qPCR，CT值小于20。
