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  • miRNA茎环法反转录试剂盒(货号:MF1201)
  • miRNA茎环法反转录试剂盒(货号:MF1201)

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CAS:
-

 :MF1201

储存条件:-20°C 储存,有效期 1 年,避免反复冻融。干冰或蓝冰运输

产品成分

 

25T

50T

RNase free ddH2O

500μl

500μl

RTase Mix

50μl

100μl

2xRT Buffer

250μl

500μl

 产品介绍

LABLEAD miRNA 茎环法逆转录试剂盒配置了高效的基因工程优化的逆转录酶,可大幅提升 miRNA RT 反应的效率。特别设计的茎环引物能够特异性地互补结合目的miRNA,通过RT反应获得加长的miRNA cDNA,该加长cDNA不仅可用于染料法qPCR, 还可用于探针法qPCR,后续检测非常方便。

产品特点

1、高效的基因工程优化的逆转录酶,可大幅提升 miRNA RT 反应的效率;

2、特别设计的茎环引物能够特异性地反转录目的 miRNA,获得加长的miRNA cDNA,不仅可用于染料法 qPCR, 也可用于探针法 qPCR。

质量控制

以合成的 U6 为样本,使用本试剂盒,茎环反转录,取 1/10 cDNA 产物进行 qPCR,CT值小于20。

 

使用方法:

11.RT 反应液配制:

 RNase-free 离心管,配制如下混合液:

RNase free ddH2O

to 20μl

RTase Mix

2μl

2xRT Buffer

10μl

Stem-loop primer(2uM)

1μl

Total RNA

10pg~1μg

轻轻混匀,5000rpm 离心 5s。 

2.cDNA 合成反应

反应完毕后,5000rpm 离心 5s,尽快放于冰上,直接进行 PCR 反应,如暂时不用,请放置于-20°C 以下温度,在半年内使用完毕,不要反复冻融。 

反应温度

时间

25℃

5min

50℃

15min

85℃

5min

3. 注意事项

3.1 用于 RT 反应的器具和水应进行 RNase 灭活处理,操作人员应佩戴口罩、手套等,以防 RNase 污染。

3.2 模板 RNA 使用量:Total RNA 可在 10pg~1μg 之间。

3.3 试剂配制过程建议在碎冰上进行,BIOG RTase Mix 粘度较大,应缓慢吸取,Tip 头不要插入液体太深,以免粘染太多酶液。

 

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