保质期1年   

一般说明

α-葡萄糖苷酶(EC.3.2.1.20)为淀粉水解酶类中的一种，它又被称为α-葡萄糖苷水解酶或葡萄糖基转移酶（GTase），是一种α-D-葡萄糖苷酶。主要在细胞外起作用。它从多糖的非还原末端水解底物的α-葡萄糖苷键，产生α-D-葡萄糖，α-葡萄糖苷酶来源广泛，在人体糖原的降解和动植物、微生物的糖类代谢方面具有重要的生理功能。检测原理是利用ρ-硝基苯-α-葡糖吡喃糖苷能被α-葡萄糖苷酶水解成黄色的产物（最大吸光率为405nm），其反应与酶的活性成正比，线性检测范围在2 - 250 U/L。

产品用途

直接检测生物样本中的α-葡萄糖苷酶活性。

试剂盒组成与保存

 缓冲液：12 mL （pH 7.0）             -20℃保存

 底物：  1 mL                 -20℃保存

 校准液：5  mL（相当于250 U/L）         -20℃保存

检测步骤

该检测基于酶催化的动力学反应，推荐使用多管移液器。反应试剂需快速加入，溶液的混合应短暂而彻底。检测可以在室温或37℃条件下进行。

准备反应试剂：所有组分放置到室温，按每孔需200μL缓冲液、8μL α-NPG底物试剂的比例，混合足量反应试剂。在室温下，反应试剂可以稳定至少一天，但仍推荐现用现配。

样品准备：酶样品可置于50 mM (pH 7.0)的磷酸盐缓冲液或其他合适的酶缓冲液中，以下化学物质会对酶活性有影响，应避免接触：如含有硫氢基的试剂（二硫苏糖醇，2-巯基乙醇和谷胱甘肽），Ca²⁺，Cu²⁺，Fe³⁺/Fe²⁺，Hg²⁺，Mg²⁺，Ni²⁺，Zn²⁺，SDS，EDTA与三羟甲基氨基甲烷等。

1．取透明平底96孔板，将20 μL蒸馏水（H₂O）加入到两个孔中。向其中一孔内加入200 μL蒸馏水，另一孔中加入200 μL校准液（总量为220 μL）。取20 μL样品加入到其它孔中，并在样品孔内加入200 μL反应试剂（总量为220 μL），轻拍使其混合。

2．读取OD405 nm值 (t = 0)，并在20分钟后再次读取该值（t = 20 min）。

酶活性计算

样品的α-葡萄糖苷酶活性（U/L）计算如下：

OD₂₀与OD₀分别为样品在0分钟与20分钟时的OD405nm值。OD标准液与ODH2O分别为校准液与H₂O的OD405nm值。

单位定义：pH=7.0时，1单位酶每分钟可催化1μmole的底物的转化。

预防措施：本产品仅供研究用，使用过程中应严格遵循实验安全措施。