货 号:MR1201
储存条件:干冰或蓝冰运输,-20°C 避光保存,避免反复冻融,有效期为 12 个月。如每次使用量较少,推荐小份分装使用。
产品成分
组 分 | 200 rxn |
2× miRNA Stem-loop SYBR Mastermix | 1.0ml ×2 |
Tag Primer | 80ul |
ddH2O | 1.0ml ×2 |
产品介绍
miRNA Stem-loop SYBR qPCR Kit 采用本公司生产的化学修饰的热启动聚合酶,使用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行 miRNA 的荧光扩增,具有高度的特异性,能够有效避免引物二聚体形成和其它形式的非特异扩增。反应缓冲液经充分优化,PCR 扩增效率高,荧光信号强,拥有更高的反应灵敏度。
产品特点
1、使用化学修饰的热启动聚合酶,反应特异性高,可有效避免非特异扩增;
2、反应缓冲液经充分优化,PCR 扩增效率高,反应灵敏度优于多家同类产品。
质量控制
以合成的 U6 为样本,使用本试剂盒,茎环反转录,按说明书进行 qPCR,CT 值小于 20。
使用方法:
一、反应液配制:
取 RNase-free 离心管,配制如下混合液:
2× miRNA Stem-loop SYBR Mastermix | 10μl |
Tag Primer(10uM) | 0.4μl |
Specific primer(10uM) | 0.4μl |
Temlate DNA/cDNA | 2.0μl |
ddH2O | To 20μl |
二、设置反应条件:
激活 Taq | 95℃ 2min |
PCR 循环 | 95℃ 10S; 60℃ 30S; 40 循环 |
熔解曲线 | 95℃ 15S;60℃ 1min;95℃ 15S;1 循环 |
* 仪器类型不同,熔解曲线采集程序不同,使用仪器默认熔解曲线采集程序即可
注意事项
1、一般来说反应体系中引物终浓度为 0.2μM 可得到较好的扩增效果。当反应结果不理想时,可以在 0.1-1.0μM 范围内调整引物浓度。
2、未稀释的 cDNA 模板,加样体积最好不超过 2.0ul,对于丰度较高的 miRNA, cDNA 样本可适当稀释后再进行 qPCR,稀释倍数可根据反应
CT 值而定。
3、如 PCR 结果不甚理想,可考虑采用 3 段法温度设置进行扩增,扩增条件为:95℃ 5min; 95℃ 10S;60℃ 20S;70℃ 20S(收 集荧光信号)。
4、试剂保存与操作过程中避免强光照射。
5、配制反应体系时,避免过于震荡,以防气泡产生。